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高效表达载体与宿主细胞的关系密切，虽然楼主认为没有什么好说的，但是本人还是唠叨两句，主要是针对抗体生产的高效表达载体构建。
目的基因的表达设计到的过程包括：目的基因在宿主细胞基因组的定位；目的基因mRNA 的转录；目的基因的翻译；翻译后的加工，组装；抗体的分泌。
这些步骤在载体的设计中都要有所体现：
1．目的基因在宿主细胞基因组的定位：目的蛋白基因整合的位点与其产量之间显然有密切的关系，为了整合到所谓的热点，可以采用类似Invitrogen Flp-in 系统，先筛选基因组的热点，然后，利用Flp重组，是目的基因有目的的整合到基因组的热点。
2．目的基因mRNA 的转录：强的启动子如CMV，ubiquitin C (UbC)。目的基因可以是cDNA，以可以带有一部分内含子，其实很多比表达载体都会带有内含子。其他的元件包括Kozak序列（GCCGCCACC ATG G）可能会提高转录的起始。
3．翻译：可以在目的基因的5’或3’加增强子，常用的包括Woodchuck hepatitis post-transcriptional regulatory element (WPRE), cHS4 insulator elements，the translational enhancer element SP163，这些增强子可能增加翻译，如SP163就是一个内部核糖体进入位点（IRES）,不过这些enhancer 是否有效，可能只有用了以后才能有结论。此外调整目的基因的编码，剔除少见tRNA编码会增加得到高表达克隆的机会。
4．翻译后的加工，组装：一般来说，哺乳动物细胞具有较可靠的分子伴侣和糖基化相关的酶。对于翻译后事情，可能不是高效表达载体构建的事情，而是对细胞系的改造，如提高或降低糖基化程度。
此外，可扩增标记基因二氢叶酸还原酶（DHFR）或者谷氨酰胺合成酶（GS）的使用可以大大增加产量。
这里举个例子，利用可扩增标记基因谷氨酰胺合成酶（GS）作为标记基因，扩增目的基因在宿主细胞基因组中的拷贝数，达到增大产量的目的。
来源于Lonza （cuturl('www.lonza.com')）的一个专利里的抗体表达载体。GS在弱化启动子SV40的下游，GS与CMV之间是SV40 内含子和polyA，有利于防止串连引起的启动子阻滞。CMV下游是目的抗体的VL的信号肽，这里是有内含子的，而且还挺长；VL后面是CL;CL与VH之间用一段linker, linker的两端为Furin酶切位点，据说可以在胞内被Furin识别和酶切；VH的后面分别是铰链Hi, CH1,CH2和CH3。这样轻重链连在一起表达，有利于保持轻重链表达数量的相同，从而有利于完整抗体的产生，避免单独的轻链造成的麻烦。
好了，就到这了，不管怎样，对于单抗的生产，20年来在生产工艺上的改进使单抗的产量提高了100倍，载体构建上可做的可能已经不多了。
