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标题:【讨论帖】动物细胞规模化培养

ero11[使用道具]
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发表于 2015-7-9 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

美国NBS的罐子现在有些是模仿德国的~~~
而且NBS在国内的售后服务太差了~~~
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-7-9 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
瑞士BIOENGEERING是当今世界历史最悠久也是实力最强的细胞反应器生产商,其自动化程度相当高,并且他们特别为法国一家生物公司定制了一套全世界最大的细胞发酵罐12.5万升,国内两家大的细胞发酵罐也出自他们之手.但是,相对于性能和稳定性,德国B.BRUAN要略胜一筹,不过德国制造的死板和严谨是有目共睹的.有别于BIOENGEERING和B.BRUAN的高端路线,美国的NBS和WHEATON价格很有优势,很适合规模小的实验室.另外荷兰的APPLICON控制系统性能稳定,非常适合组装细胞发酵系统.
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-7-9 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位有经验的人士(cccDNA 等诸君):
能说说你们CHO 系统发酵经验和心得吗?
以及你们有什么值得推荐的CHO 发酵方面的书??
谢谢先
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okhaha[使用道具]
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发表于 2015-7-9 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

贴壁细胞比较适合NBS的系统，特别是固定床
而要悬浮，较大规模培养，现在德国B.Braun做得不错
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-7-9 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

新手，我们用的是NBS的5L罐。新买的14L已经到货了。我们也象realff说的，想改进工艺但有点无从下手。多谢楼主开此贴，我会第一时间关注的。
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发表于 2015-7-9 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Factors impact volumetric productivity
对于一个好的工艺来说，各个环节的对最终结果（Volumetric productivity) 的影响贡献比例大致如下：
a, 载体构建及工程株筛选，50％
b,培养基配方及加料（或灌注）策略，30％
c, 反应器及过程参数优化，20％
也就是说有一个好的工程株，你就成功了一半，剩下的50％是工艺优化问题。
对于反应器的品牌，B.Braun的比较适合做工艺优化。至于放大而言，如果到上千升的体积，大多需要针对工艺专门的过程工程设计，没有买现成产品安装的。B.Braun也有2500L的设计案例。这是一个比较复杂的环节，我想不到具体谈判环节是不会知道那家公司更合适的。
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发表于 2015-7-9 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Chemically defined or Serum free?



关于Chemically difined 还是 Serum free还是有很多讲究，不同的公司定义不完全一样。抛开字面上的表述，主要集中在以下方面：
－a,是否含 Insulin，Insulin可以帮助细胞代谢，和抗凋亡作用，对于CHO细胞而言也可以提高蛋白表达。去掉的目的，一为成本，二为药物认证方便（外源蛋白对于生物制品始终是一个潜在不安全因素，一在于蛋白本身，二在于外源蛋白生产过程可能引入了其他污染风险）。
－b,是否含Transferrin
－c,是否含EGF或其他如Fetuin类外源蛋白
－d,是否含Hydolysate一类水解物
抛弃这类物质主要出于：安全，成本和下游工艺的考虑。但是就目前来说，Chemically difined的培养基在效果上尽管有很多进展了，但还是需要提高。多数表现良好的培养基，只是做到Protein free,一般会含有Hydolysate一类非动物源性水解物。
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发表于 2015-7-9 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

GS or DHFR?



GS系统而言，筛选时间缩短了，因为其并不靠大量扩增目的基因拷贝数来达到高表达目的，一般来讲该系统的细胞单产（ specific productivity)要低于DHFR系统，但由于这种系统不需要加入Glutamine 以及采用的CHO-K1具有生长优势，所以总体来讲门槛比较低。
GS系统是Lonza的专利，今年已经在中国授权了，用GS系统是要冒被诉讼的风险的，除非愿意交高额的专利费和版权税。
大多数企业用DHFR系统，虽然费时但已经比较成熟了。现有的商业化载体（比如Invitrogen的pC DNA 3.3/pOptiVEC™-TOPO)已经很好了。进一步的载体优化是各公司的商业秘密，各有各的绝招，但个人认为只是锦上添花的事，不会有根本上的颠覆。载体对于特定蛋白或抗体的表达效率基本上用瞬时表达的方法就可以做评估了。
用DHFR扩增系统在Bioprcess Intl con&exibition， 5g/L左右的表达也已经报道过了。Amgen内部消息，甚至有更高的表达量(10g/L)，虽然这个受到挑战。
要得到高表达的工程株，除了载体以外，还需要高通量的筛选方法，因为目前成熟的转染方法都是随机整合，筛的克隆越多，得到高产株的可能越大。当然整个筛选过程，有时需要和驯化以及培养基优化Overlap起来以提高效率和放大高产克隆的表达优势。
现在基于PER.C6的新的表达平台也很轻松就能达到5g的表达量了，但是一样的因为专利和版权税的问题，除了比较大的制药公司在开发外，并没有得到大肆推广。当然，也有认证方面的问题，这个比较复杂一点。
其实对于蛋白表达来讲，titer并不意味着一些，产物的质量（糖基化，均一性等等）也是很大的议题
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ukonptp[使用道具]
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 小中大

Formulations and its issues in scale up


关于价格问题，不能看常规的Cat. product, GIBCO和JRH的优势在于技术服务和定制产品。很少临床上用的到产品是一成不变的使用目录产品的，对于工业级细胞培养而言，目录产品只能用于初期研发，在生产阶段是需要针对性优化的。
对于工业生产用培养基而言，配方是基础，但又不仅仅是配方优化这么简单。对于配方优化这样的工作，Amgen及GIBCO研发都运用了Micro bioreactor系统，功能完全开发出来后，一次可以运行上千个反应器类似的实验，这不是一个普通实验室可以达到的。但一个可以用于工业生产的配方，需要满足很多的条件，大规模生产条件下会把更多的不稳定因素放大，比如：容器吸附及相容性，组分相容性及稳定性对配制与储存的影响，应对更大的剪切力及更低效传氧与混合所带来的代谢变化，大规模培养下由于各环节均区别于中试而产生的如何应对产物质量诸如后修饰等等问题。
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bs4665[使用道具]
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 小中大

这个专题开的好啊，没有有人做293的大规模培养啊？
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