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标题:【转帖】【分享帖】原代培养海马神经元经验

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2015-7-11 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很想看，最近取材很不成功。
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gogo[使用道具]
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发表于 2015-7-11 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是测神经元胞内钙离子浓度的，我是急性分离海马，消化吹打成单细胞的，不过用的是成年鼠，不知道有没有人做这方面的实验啊？
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发表于 2015-7-11 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2015-7-11 11:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我是测神经元胞内钙离子浓度的，我是急性分离海马，消化吹打成单细胞的，不过用的是成年鼠，不知道有没有人做这方面的实验啊？

原代培养海马神经元主要用于研究神经发育毒性，如果研究急性体外的神经毒性，我觉得成年鼠的组织切片短时间培养也是可以的，个人之见，仅供参考
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发表于 2015-7-11 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主及各位培养专家还在吗，我养的海马神经元纯度和状态还较满意，但就是背景很脏，起初以为是培养基什么的时间久了有杂质，但换了新的培养基、新的PLL还有手术器械，相关试剂等，背景还是那么脏，漂亮的神经元下是一层黑色的团块，真不知道是什么原因，这样的图很难看啊，可怜了我那漂亮的神经元，大家能帮我想想是什么原因吗？先谢谢各位了！

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应该是未贴壁的死细胞或组织团，你选的筛网是多少目……如果细胞未贴壁的话，第一次换液应该能下来
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发表于 2015-7-11 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的海马细胞在准备换液的时候总是聚集，本来7-8个小时的时候是好的，可是不知道为什么24小时 换液的时候就聚集的了 ？请问楼主是为什么？

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聚集是神经元的特性，尤其到培养后期，成簇团状，我的课题做神经元间的粘附分子机理，兴许与之有关系拔，呵呵
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发表于 2015-7-11 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是苦于没有积分想看看不了啊。你可以发一份到我的邮箱吗？我也是进行神经细胞的原代培养的，感觉最大的问题就在于制备单细胞悬液那个环节。有时候消化不够，有时候消化过度。每次接种以前我都会用细胞计数板观察细胞的状态和密度的，但是接种到培养板里效果又变了。我觉得是自己吹打得不均匀，导致计数板观察到的样本代表不了总体。我现在每次都得用96孔板的几个小孔来观察细胞状态再接种。但问题是细胞用肉眼看不见，我这样凭感觉的吹打好像很不靠谱。还有就是想问你用什么牌子的培养板？为什么最近我发现我接种的细胞在孔里分布不均与，中间密度高周围密度低？难道是板底部不平？请赐教，谢谢！
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