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标题:【转帖】如何杀灭所谓的”黑胶虫“

xevin[使用道具]
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这些黑点是什么?(10倍物镜)


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xevin[使用道具]
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同上图所示的黑点(20倍物镜):


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wu11998866[使用道具]
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图中箭头所示的黑点是死细胞吧?

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我觉得是死细胞。肯定不是微生物污染。
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wu11998866[使用道具]
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同上图所示的黑点(20倍物镜):

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兄弟,你做的是克隆化培养吗,稀释得这么厉害,细胞好少啊,我看像是污染了。
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wu11998866[使用道具]
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个人觉得该图片上黑点就是所谓的'黑焦虫',但本人亦同意前面战友所说,细胞培养中根本没有什么黑焦虫,常见的黑点少数为血清中沉淀颗粒,显得培养基不干净。多数为细菌,就象上面图片中的。我曾在试验中对出现的“黑焦虫”进行培养,接种到LB培炎基上,结果发现有细菌生长。本拟对之进行详细的细菌种属鉴定,但因事放弃了。凭经验推测,主要为革兰氏阳性细菌,所以一般抗生素效果不好,难以清除。由于污染实验室的阳性菌通常致病力弱,所以见到细胞未受较大影响,但“黑点”繁殖太多时,因为竞争营养及产生代谢产物的缘故,细胞状态还是会变差。建议:
1.如果遇到这个东西,细胞能够重新复舒,强烈建议及早弃去污染了的细胞,以免同一培养箱中其他细胞被污染。我在作稳定表达细胞株快成功时遇到过这种情况,恨不忍心前功尽弃,结果加入3倍双抗以及庆大,还是没彻底搞掉,最终结果还是放弃,全部重头再来。
2.如果细胞很快要收集用于检测试验(比如转染后),而黑点不多,细胞状态尚好,可以每日用PBS多洗数次,加入高剂量双抗(不一定有效,因为污染细胞的弱毒性细菌还是很多种)
3.如果需要作转染,还是不宜用这种细胞,影响细胞状态较大,转染效果不好。
......

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我觉得楼上的分析比较有道理,你的细胞应该是被污染了,如果反复复苏总有这样的情况,建议你用一下我的那个配方,或许有帮助。另外补充一下,建议大家以后少用“黑胶(焦)虫”这个称呼,听起来挺恐怖的,哈哈。
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wu11998866[使用道具]
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我养的293细胞在剧烈操作后(胰酶彻底消化掉瓶内细胞,再从其他瓶的293传入293细胞)出现过比较明显和严重的“小黑点”现象,但我持续培养和观察了一周,发现对细胞生长确实影响不大,我甚至还冻存了一些这种293细胞。如果真是细菌污染,为什么培养基始终较透明,没见到浑浊呢?且细胞的生长状态较好又如何解释?到底是不是细菌,恐怕我们还是要心存一些疑问。

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很可能胰酶不能完全消化去除的死细胞碎片沉积。
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xyw5[使用道具]
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我在细胞培养中也见过这种东西,细胞室老师说是黑胶虫,去不掉
如果没有明显污染的话,建议继续培养
所以我想问楼主
如果是细菌的话,为什么这种“虫子”对细胞生长影响不大,甚至没什么影响
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wu11998866[使用道具]
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我在细胞培养中也见过这种东西,细胞室老师说是黑胶虫,去不掉
如果没有明显污染的话,建议继续培养
所以我想问楼主
如果是细菌的话,为什么这种“虫子”对细胞生长影响不大,甚至没什么影响
......

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你说的很对,任何微生物如果不是明显污染,对细胞生长的影响都不大,有些细菌在双抗的作用下繁殖能力降低,长得很慢,有些抗药性强的长得很快,这还和你的细胞养多久及换液或传代的间期有关。
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www.1[使用道具]
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不是我将细胞稀释这么厉害,而是放置了比较长时间,细胞差不多没了,只剩下哪些圆圈中那样的黑点了。
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greenbee[使用道具]
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我的细胞也有这种扭动的小虫子,随着细胞状态的变化而增加,细胞好时看不到,细胞状态下来它疯长,现在又有不动的小黑点,我的细胞都停下不敢养了,怀疑为血清问题,怎么解决阿?
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