小中大个人觉得该图片上黑点就是所谓的'黑焦虫',但本人亦同意前面战友所说,细胞培养中根本没有什么黑焦虫,常见的黑点少数为血清中沉淀颗粒,显得培养基不干净。多数为细菌,就象上面图片中的。我曾在试验中对出现的“黑焦虫”进行培养,接种到LB培炎基上,结果发现有细菌生长。本拟对之进行详细的细菌种属鉴定,但因事放弃了。凭经验推测,主要为革兰氏阳性细菌,所以一般抗生素效果不好,难以清除。由于污染实验室的阳性菌通常致病力弱,所以见到细胞未受较大影响,但“黑点”繁殖太多时,因为竞争营养及产生代谢产物的缘故,细胞状态还是会变差。建议:
1.如果遇到这个东西,细胞能够重新复舒,强烈建议及早弃去污染了的细胞,以免同一培养箱中其他细胞被污染。我在作稳定表达细胞株快成功时遇到过这种情况,恨不忍心前功尽弃,结果加入3倍双抗以及庆大,还是没彻底搞掉,最终结果还是放弃,全部重头再来。
2.如果细胞很快要收集用于检测试验(比如转染后),而黑点不多,细胞状态尚好,可以每日用PBS多洗数次,加入高剂量双抗(不一定有效,因为污染细胞的弱毒性细菌还是很多种)
3.如果需要作转染,还是不宜用这种细胞,影响细胞状态较大,转染效果不好。
......
==============================================================================================================
我觉得楼上的分析比较有道理,你的细胞应该是被污染了,如果反复复苏总有这样的情况,建议你用一下我的那个配方,或许有帮助。另外补充一下,建议大家以后少用“黑胶(焦)虫”这个称呼,听起来挺恐怖的,哈哈。