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标题:【求助】请高手鉴定破骨细胞

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发表于 2015-7-11 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢 前辈
那么如何防止细胞的大片脱落呢？
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发表于 2015-7-11 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
脱落是正常现象，证明你的ＲＡＮＫＬ有作用．
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发表于 2015-7-11 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

前辈
我上次养osteoclast，细胞的大片脱落是发生在9天后， 所以 我想尽量缩短在9天以内完成osteoclast的培养。
上次在100ng/ml RANKL 16ng/mlMCSF 条件下 是有好多多核细胞 但是>3的不多.
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发表于 2015-7-11 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前辈
我上次养osteoclast，细胞的大片脱落是发生在9天后， 所以 我想尽量缩短在9天以内完成osteoclast的培养。
上次在100ng/ml RANKL 16ng/mlMCSF 条件下 是有好多多核细胞 但是>3的不多.

==================================================================================================

if cells partially dying from D2, it is a good phenomenon (RANKL effectively). your cells dying of overgrew (D9), no good.
check either your cells or the qulity of your RANKL. (I guess something wrong in your cells)
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发表于 2015-7-11 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这次我用12well plate, 10^6cell/well, from D2,0.5ml培养液的那个well,有好多细胞dying, 我不知道还要不要继续这个well.
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发表于 2015-7-11 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

但是 0.75ml 的well, 细胞数一样，RANKL量一样，就没有问题，不知道怎么回事
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发表于 2015-7-11 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 DCS 于 2015-7-11 18:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

但是 0.75ml 的well, 细胞数一样，RANKL量一样，就没有问题，不知道怎么回事

你指的0.75ml 的well（的plate）是多少well的，是和什么plate(or chambered slides)相比的？你说没有问题，可能是误判．不知道你发现没有，RAW264.7细胞本身（不加ＲＡＮＫＬ）就有一些多核细胞，你说加RANKL最多只能诱导出３个核的破骨细胞，显然不是成功的．
对不起，我提了许多意见，但愿对你有所帮助．
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发表于 2015-7-11 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

plate是 12well plate, 我就是在这个plate里面，同时做了control (treat nothing),都是10^6cell/well, 但是分成0.75ml 0.5ml 两个情况，对于每个情况分别treated with 100ng/150ng/ml, 但是三天后都没有明显的fusion. 并且 在0.5ml的well里面分别有一个加了cytokine的和没有加 cytokine的well里面大量细胞在第二天死掉。
还有我用的是humanRANKL, is that ok? I saw some paper they use hRANKL.
非常感谢前辈，对我很有帮助！！！
BOW~~~~~
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发表于 2015-7-11 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 DCS 于 2015-7-11 18:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

plate是 12well plate, 我就是在这个plate里面，同时做了control (treat nothing),都是10^6cell/well, 但是分成0.75ml 0.5ml 两个情况，对于每个情况分别treated with 100ng/150ng/ml, 但是三天后都没有明显的fusion.  ...

too many cells/well but medium (nutrition) was not enough.
I guess human's works on mouse cells too.
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发表于 2015-7-11 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那我现在换成12 well plate, 10^5cell/well, 您看怎么样？
100ng or 150ng/ml RANKL
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