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标题:【求助】请高手鉴定破骨细胞

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发表于 2015-7-11 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那个骨片实验应该是必须做的．否则没有说服力，那个东西肯定没卖的，我见过的都是自己制作的. 似乎要求做的非常薄.
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发表于 2015-7-11 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你用的是长骨分离的还是诱导法，从前几张来看好像是长骨分离法，但是后来你换液的时间，和培养液又是诱导法。请问你是用什么培养基？
我现在也是在分离破骨细胞，用的是机械长骨分离法，细胞出来了，但是我有时候我分辨不清有些是多核的破骨细胞，有些是多个单核细胞聚集在一块，可能是我的显微镜不太好吧。还有就是单核细胞比较多，正在想用什么办法过滤一下。你的第二张照片我也看到过，一堆单核细胞中，看到一个体积比较大的细胞，但是胞浆比较均匀，不像多核的样子，有谁能告诉这个是什么细胞？
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发表于 2015-7-11 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是长骨分离法，并没有经过诱导培养，培养基也只是DMEM培养基+ 双抗+15%小牛血清。单核细胞多的原因是，破骨细胞还没有完全分化，而且单核细胞也不会贴壁，一旦贴壁，伸出伪足才会显现破骨细胞特征。那个大的细胞我感觉不像是破骨细胞前体，具体什么我也不敢说。通常我经过3-6天培养后，进行染色，多核细胞显现比较明显。
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发表于 2015-7-11 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这位战友，我对破骨细胞培养的方法理解和你有不同。长骨分离法取得的细胞就已经是成熟的破骨细胞了，从骨髓中取出的细胞悬液30分钟左右就需要换液一次，是那时候成熟的破骨细胞已经贴壁，通过差异贴壁的方法稍微纯化一下破骨细胞。这个时候如果不加入诱导因子，破骨细胞的前体细胞是不会向破骨细胞分化的。而且成熟的破骨细胞在体外的存活时间一般在3-6天。
其中理解可能有误，请指正。
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发表于 2015-7-11 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢指正！可是，我刚刚分离出来的细胞培养30分后没有破骨细胞的任何基本形态，而且染色后依然没有多核形态。而且我培养10天后仍然没有死亡。上面的染色图片就是我6-8天左右染色的结果。我是遵照一些博硕论文上面的方法操作的，基本上都没有用到维生素诱导。我想经过染色，看到的多核细胞（最后一张图片）应该就是破骨细胞。谢谢你提出的宝贵意见。期待与您继续探讨！
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发表于 2015-7-11 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问战友用的是什么动物？我用的是幼鼠（4周龄），不是乳鼠。会不会种属之间，年龄段之间还会有差异呢？期待回帖。Smile
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发表于 2015-7-11 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
骨质疏松症
应该不会是种属之间的差异，幼鼠的成熟的破骨细胞更加容易存活而已。我觉得机械分离法培养破骨细胞最重要的是提高成熟的破骨细胞的纯度，它不像诱导法那样可以得到大量的破骨细胞样细胞（osteoclast like cell)，有一篇文献的提高纯度的方法我觉得挺好的，正准备也用此法，你可以参考一下：“高纯度破骨细胞分离培养与功能表达”中国骨质疏松杂志　2001 年2 月第7 卷第1 期。你用此法试试呢？咱们交流交流。　
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发表于 2015-7-11 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再请问这位战友，做骨吸收实验的时候，我想用象牙片，你知道怎么获得吗？谢谢。
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发表于 2015-7-11 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢战友提供信息给我！我想用牛骨片，这东西没得买，只能自己做，要买新鲜的牛骨，-30度冻存后，用钢尺锯分割成200微米左右，然后用金刚砂石磨成10-50微米厚，冻存，使用前进行相应处理即可了。我觉得象牙骨片可能更不好买到吧，而且买到会新鲜吗？
我是学食品营养的，对破骨细胞要求可能没那么严格，只要有趋势就可以，我现在很想知道，我最后一张染色后图片，是否就是破骨细胞呢？请多多指教。
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gogo[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

瑞氏染色我没有做过，不太了解。你的最后那张图片我觉得很像破骨细胞，多核，伪足都能看到。如果方便的话再做一下trap染色，骨吸收实验更好。
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