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标题:【求助】请高手鉴定破骨细胞

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发表于 2015-7-11 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前辈
如果不用hematoxylin复染的话，是不是就是在37度孵育1个小时后 将溶液倒出，在空气中干燥后 显微镜下观察？
我现在想不起来cat No.了，得去实验室查一下

==================================================================

10-15 min maximum will do, at 37oC. But not Sigma kit. Sigma kit is an hour.
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发表于 2015-7-11 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前辈
再问一个问题
在每一个well里面， 好像如果培养液 越少，也就是每一个well里面培养液高度越小，细胞反而长得更快。所以 在设计每个well的液面高度时候 又没有什么讲究呢， 还是每一种细胞都不一样？我想，可能是液面越低，越容易氧气渗透。
非常感谢
......

==============================================================================================================

(1) when you plate RAW264.7 cells, you add sRANKL. (same time).
(2) cells will stop to proliferate when sRANKL is added, so your problem is not a problem.
(3) the reason you have this problem (cells still dividing when RANKL added) is: your raw264.7 cells are too old (i mean the generation).
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发表于 2015-7-11 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

前辈
还有个问题，如果每个well, 2-10*10^6 cell, 那就差不多每天都要换培养液了，RANKL的消耗很大啊
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发表于 2015-7-11 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

前辈
非常感谢阿，bow~~~
cell still dividing when RANKL add,除了the cell generation is too old(我用的是15代,应该多少代之前比较好呢？) 是否还有因为我加了M-CSF? 这个cytokine可以让osteoclast precursor分裂。
谢谢！！
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 小中大


QUOTE:
原帖由 DCS 于 2015-7-11 18:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

前辈
还有个问题，如果每个well, 2-10*10^6 cell, 那就差不多每天都要换培养液了，RANKL的消耗很大啊

2-10 million cells per 60-mm Petri-dish. If you use small wells in a plate, certainly cell number has to be reduced.
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 小中大


QUOTE:
原帖由 DCS 于 2015-7-11 18:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

前辈
非常感谢阿，bow~~~
cell still dividing when RANKL add,除了the cell generation is too old(我用的是15代,应该多少代之前比较好呢？) 是否还有因为我加了M-CSF? 这个cytokine可以让osteoclast precursor分裂。
...

There is no any difference with/without M-CSF, but M-CSF is not necessary.
Passage <20 should be ok for osteoclasteogenesis.
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发表于 2015-7-11 18:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

前辈
我的sigma的TRAP assay kit的 catalog No. 387A-1kT.
孵育一个小时以后，再复染。而且他还要做一个没有tartrate 的对照，不知道是不是也用不着。
如果不想复染，是不是就是 避光孵育1个小时以后，自来水冲洗， 空气风干 就可以显微镜下观察了呢？
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 小中大
前辈
你是说generation>20就最好不要用了么？
rawcell 长得太快了。
谢谢！！
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 小中大


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原帖由 DCS 于 2015-7-11 18:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

前辈
我的sigma的TRAP assay kit的 catalog No. 387A-1kT.
孵育一个小时以后，再复染。而且他还要做一个没有tartrate 的对照，不知道是不是也用不着。
如果不想复染，是不是就是 避光孵育1个小时以后，自来水冲洗， 空气风干  ...

I do not like that kit for cells labelled as brown but not dark red (more pretty).
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 小中大


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原帖由 DCS 于 2015-7-11 18:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
前辈
你是说generation>20就最好不要用了么？
rawcell 长得太快了。
谢谢！！

freeze some younger cells.
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