小中大【回复】
为什么大家把溶解曲线看的这么重要呢,我觉得本末倒置了,若是你的扩增曲线都没有再一定范围内起峰的话,溶解曲线即使是单一峰又有什么用呢?况且你还要看峰的尖锐程度,峰的高低。我就说这么几个例子吧:
1. 以前用某乐的96-microplate,总在77~80度左右有单一小侧峰,考虑引物问题等众多事情后仍旧无解,最后同样实验条件使用某A的8-Strip tube,前边的杂峰消除。
2. 做过NTC,发现三重复都在38Ct时左右起峰,溶解曲线很单一,与内参同温度,但峰最高值是其一半左右,至今仍无解。
所以你只能有扩增才能用溶解来证明是不是扩增正确,而不能没扩增却用溶解来说明有扩增,如果实在不放心,那就那扩增产物跑胶,理论可行,但我没有试过。