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标题:【求助】液相色谱测花青素含量中遇到的问题

蛋白之安基[使用道具]
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发表于 2015-7-18 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】液相色谱测花青素含量中遇到的问题

求助  ！液相色谱（新买的不太懂，跟一个小师傅学了基本操作之后小师傅就走了）测蓝莓原汁中花青素的含量时 ，我们自己做的结果跟小师傅做的值相比峰面积要大好多，一直找不到原因 有谁懂这个啊  帮帮忙吧  谢谢了！

我们一开始以为是流动相配错了，后来又重新配的 还是不行。我们的那个样品处理中需要回流，我们回流装置还没有到占时先用的蒸馏的冷凝管上头塞了塞子将就用的，密封不太严会有影响吗？如果没影响的话哪里会出问题呢?
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2015-7-18 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好：
首先你可以先评价一下色谱系统的稳定性，如果你手里条件不够的话，你就用80%甲醇做为流动相，用流动相溶解适量的萘，然后进样6-11次，考察系统的保留时间和峰面积的相对标准偏差，按照药典的要求RSD>2%,实际上评价的话我们尽量控制在1% 以下，如果符合要求我们就确认系统稳定性性对来说没有什么问题。你的小师傅做的实验的峰面积和你的不同也是有可能的。柱子型号、流动相、流速等都会引起峰面积的改变，不知道你具体是什么情况，你可以贴几张图上来看看，相信会哟很多人给你一些帮助的，没有了解具体的情况，别人也很难给你正确的建议。
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发表于 2015-7-18 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哦  真是太感谢了 能有人回复并且愿意帮我真的很开心，还以为会石沉大海了呢  说是话多少有些激动呢  呵呵！！
图谱我有但我这电脑看不了，我只能添加在附件里了，大家要是看不了的话 ，下次我想办法弄图来。嘿嘿  ！非常感谢大家。
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发表于 2015-7-18 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上图~~~~~~~~~~~


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发表于 2015-7-18 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大



保健食品中原花青素含量的测定方法

   发布时间：2007-10-5 22:41:18   关闭该页 1、原理
原花青素易溶于含羟基的溶剂如甲醇等，本方法是将样品中的前花青素，用甲醇提取，加入盐酸家温水解后将其转化为深红色氰定（C15H10O6·HCL）后进行高压液向色谱测定。

2、试剂：
2.1二氯甲烷 分析纯
2.2甲醇 色谱纯
2.3异丙醇 分析纯
2.4甲酸 分析纯
2.5盐酸 分析纯

3、检验方法
3.1样品 称取约500mg油溶性样品于100ml锥形瓶中，加入5.0ml二氯甲烷，振摇使其溶解。加入45.0ml甲醇，振摇5min后过20μm滤膜。取5.0ml滤液于25ml容量瓶中，加入5.0ml3mol/L盐酸，振摇并用异丙醇定容至刻度。立即过5μm滤膜，取出一部分置于试管中，塞紧瓶塞并在100±5℃烘箱中放置45min进行水解，取出后放置至室温后进行液相色谱分析。
3.2标准 除称取25.0mg标准品于100ml锥形瓶中外，其余步骤均同样品。
3.3定量方法 标准曲线外标法定性定量分析。

4、色谱分析条件
4.1流动相：水：甲醇：异丙醇：甲酸＝73：13：6：8
4.2检测波长：525nm
4.3色谱柱：岛津Shim－Pak CLC ODS 15cm×6mm
4.4柱温：35℃
4.5流速：1ml/min
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发表于 2015-7-18 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不完全一样 上面是我们使用的方法
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