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标题:【求助】hplc制备问题请教

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发表于 2015-7-20 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】hplc制备问题请教


1：样品进样量小时（10mg），出峰正常。
2：样品量稍大（30），有一部分没有保留出峰。一部分原来位置。
3：样品量加大（50mg）完全没有保留时间。
请问是虾米原因。
过载？离子化？如果是离子化，具体什么原因，针对2，3情况。应该看哪方面理论知识。
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yes4[使用道具]
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发表于 2015-7-20 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是和物质的极性有关的
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dhpbj[使用道具]
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发表于 2015-7-20 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原因不能一下确定。
假如是明显酸碱性的物质，那就是你的pH值不合理
如果与酸碱性无关，那是严重过载导致色谱柱吸附保留体系崩溃了
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yes4[使用道具]
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发表于 2015-7-20 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

色谱柱载量。量大会缩短保留时间。
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ssonglikihi[使用道具]
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发表于 2015-7-20 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品在流动相里的溶解度怎么样？要是很小就会出现这种情况，还有就是假如是反相色谱是不是样品极性太大了，没什么保留了
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发表于 2015-7-20 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
色谱柱的峰容量比较下啊
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vtongli[使用道具]
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发表于 2015-7-20 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

溶解样品的溶剂是不是要比初始流动相洗脱能力强？从10mg增加到50mg是不是样品浓度是一样的只是加大了5倍进样体积？
个人建议方法运行开始降低有机相比例保持一段时间，再梯度洗脱，可以解决这个问题。
或者理论上讲用流动相溶解样品应该可以解决这个问题，没试过，用上面方法都搞定了。一般用流动相溶解会造成样品体积很大。
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发表于 2015-7-20 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是酸法制备吧！解决这个问题的就是要增加样品在柱头的有效保留。有两种方法可以解决。1.
起始梯度低（5％MeCN 两分钟），溶剂强度较弱，样品保留在柱头的几率增大，从而减小柱穿透效应的产生的可能性。2.在进样系统中加入柱头稀释，这时样品组分在一段时间内缓慢进入色谱柱，经过流动相的稀释，更容易在柱头保留，从而不会形成柱穿透效应。
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H2O[使用道具]
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发表于 2015-7-20 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
和你的样品的性质有关，比如碱性的样品会在碱性的溶液中上样量急剧减少，同样的道理酸性的样品也是一样的。
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