PCR仪

我也是看那项不符合再修改那项，不知道这样放宽条件设计的引物好用吗，你有没有试过这样的能P出来吗？
这个扩出来的是1208bp，太长了吧，引物长度是可以改，但是跟PCR产物的长度没有关系吧，我是想问怎么设计几百的PCR产物长度。多谢了，这个设计软件的网站很好用。

请教：
我需要在引物上引入酶切位点怎么办呢？就是有几个碱基会和模板不匹配，是直接把模板的相应位置的碱基修改之后再贴上去搜索引物吗？

请问P的片段哪里搞呀

请教下要设计巢式PCR的引物又该怎么设计呢？要引入酶切位点又该怎么办呢？

我现在按照你提供的网址检索大鼠的GnRH及受体的引物,象没有,不知道是我的操作问题,还是其他原因？

你要扩的片段序列未知是吗？

你好，我根据你上面的信息做了设计，请你帮忙看一下这么改合适吗，谢谢！ Get primers




Primers for PCR

There were 0 forward primers in the valid range for GC content.

ERROR
The GC range was too stringent, no primers were found in that range
然后我将Minimum GC: ４０ Maximum GC: 70
出来以下结果Primers for PCR

There were 39 forward primers in the valid range for GC content.
There were 66 reverse primers in the valid range for GC content.
There were 19 forward primers in the valid range for melting temperature.
There were 11 reverse primers in the valid range for melting temperature.
There were 19 forward primers with valid self anneal values.
There were 11 reverse primers with valid self anneal values.
There were 19 forward primers with valid self end anneal values.
There were 11 reverse primers with valid self end anneal values.

There were 209 pairs of valid primers.

This is the BEST pair of primers

List of all valid pairs of primers

然后我用This is the BEST pair of primers是不是就ｏｋ了

给大家提供一些设计引物注意事项，这是有经验的教授告诉我的，他们用眼睛就能看出来:

1．引物必须位于起始密码子与终止密码子之间，即CDS之间
Start coding: AUG ( atg )
Stop coding: UAA、UAG、UGA ( taa tag tga )
2．要使目标序列与内参在同一胶中电泳 则扩增片断长度要差开。且Tm要互相接近
3．引物终止于G或C比较好。

1 cctccgaaac catgaacttt ctgctctctt gggtgcactg gaccctggct ttactgctgt
61 acctccacca tgccaagtgg tgaagttcat ggacgtctac cagcgcagct attgccgtcc
121 aattgagacc ctggtggaca tcttccagga gtaccccgat gagatagagt atatcttcaa
181 gccgtcctgt gtgcccctaa tgcggtgtgc gggctgctgc aatgatgaag ccctggagtg
241 cgtgcccacg tcggagagca acgtcactat gcagatcatg cggatcaaac ctcaccaaag
301 ccagcacata ggagagatga gcttcctgca gcatagcaga tgtgaatgca gaccaaagaa
361 agatagaaca aagccagaaa atcactgtga gccttgttca gagcggagaa agcatttgtt
421 tgtccaagat ccgcagacgt gtaaatgttc ctgcaaaaac acagactcgc gttgcaaggc
481 gaggcagctt gagttaaacg aacgtacttg cagatgtgac aagccaaggc ggtgagccgg
541 g
版主:你好.以上是我的原文序列,麻烦你帮我设计一下引物好吗,谢谢!