PCR仪

我从事这项技术两年多,发现该技术也存在很多缺点,虽然原理上特意性很高,但假阳性也很多.

1）的确，LAMP扩增产物不能够进行测序，克隆，表达。这不是它的长处，它的最大优点是：时间快、等温和高产量，因此最大的用途就是病原微生物的快速检测等。如果要做测序，克隆，表达，您根本就不用考虑它。

（2）把在F3和B3之间的扩增条带切胶回收，连入载体，然后再去测序，这也只能说明您切下来的条带是什么，还有太多的条带你切不下来。所以，更具说服力的是，用F1和B1之间的序列做探针去杂交。

（3）特异性的问题，PCR仍然存在，不过LAMP更加复杂一些。当然用酶切、杂交及您说的测序可以作出初步的判断。我想，用F1和B1之间的序列做TaqMan探针荧光定量，应该能够知道是否特异扩增了。

（4）灵敏度。二者比较的可行性的确值得商酌。标准的东西，是很难的。但是，不管PCR是否已经达到最好的扩增能力，但扩增方案一旦确定（尤其对于病原微生物检测的试剂盒），您就一般不会变更它。反过来，你也不用证明LAMP已经达到最好的扩增能力。从理论上看，LAMP的后续扩增可以不依赖引物和模板，因此，它的扩增能力比PCR强是可能的。

最后，我想说，没有十全十美的技术。每一种方案都有它的优缺点，关键是看您需要做什么。没有最好的，只有相对更合适的。

防止污染可以用UNG酶，温度只能是65度，30min可基本灭活。所以，如果用了UNG，LAMP前段的扩增产物会部分被消化。解决办法是：延长反应时间至90min。

杭州某公司开发出的切口酶扩增技术是在SDA技术的基础发展起来的，已经申请了专利，不知道您对该技术了解多少？