小中大LAMP针对靶序列上6个区段,设计四条特异性引物,利用具有链置换活性的聚合酶,在65℃左右对核酸进行扩增。短时间(0.5~1h)扩增效率可达到10e9个拷贝。LAMP反应中,产生副产物焦磷酸镁乳白色沉淀,利用浊度仪可定量检测,或结合荧光染料实现或定量或肉眼判读结果。不需要PCR仪和检测仪器,仅水浴锅即能完成反应。
滚环DNA 扩增(RCA) 是一种等温信号扩增方法,既可进行靶核酸扩增,也可进行信号放大扩增。RCA有线性与指数两种形式。线性RCA是引物结合到环状DNA上后,在DNA聚合酶作用下被延伸,产物是具有大量重复序列(与环状DNA完全互补)的线状单链。线性RCA用于靶核酸扩增仅限于一些具有环状核酸的病毒、质粒和环状染色体,线性扩增倍数为10e5。指数RCA原理与线性RCA相同,采用与环状DNA序列完全一致的第二种引物,该引物与第一次线性RCA产物结合并酶促延伸,其产物又作为第一种探针的模板,这样一来在很短的时间内(1h),产物呈指数递增。指数RCA可用于非环状DNA的扩增,设计一引物,其两端可结合到一段连续的序列上,并形成缺口,在连接酶作用下,引物被连接成环状。此环状引物可作为RCA的模板,进行指数扩增。指数扩增倍数能达10e7。RCA 是一种适合在芯片上进行信号扩增的技术,它既能提供研究分析的敏感性和特异性,又能保持立体分析的多元性。RCA 亦是一种痕量的分子检测方法,可用于极其微量的生物大分子和生物标志的检测与研究,也可用于突变与SNP的检测。
解链酶扩增技术(HDA)则是解旋酶解开双链DNA,单链DNA结合蛋白与单链结合,使模板处于单链状态并保护其完整性,引物与模板结合,然后在DNA 聚合酶作用下扩增。生成的dsDNA作为底物进入下一轮扩增。恒温扩增温度取决于所用的酶,可以60~65℃,也可以是37℃。