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标题:国内外SNPs研究的进展及展望 [转自 丁香园论坛]

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向大家推荐一个检测大样本量的SNP位点的新技术平台--sequenom。利用质谱技术,通过“称量”寡核苷酸的分子量来分析SNP。适用于对样本数很大,但筛查位点相对较少(几百个)的研究。大家可以上网搜一下这个技术。
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呵呵,我有个恒温检测SNPs的方法,可惜是公司商业秘密,个人觉得是检测技术里最好的,是相当的simple.
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这个帖子实在说snp的发展和疾病的关系
商业活动就算了吧
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在HapMap之后,与SNP有关的另外一个需要密切关注的发展方向是Cancer Genome project: 美国NIH的Cancer Genome Atlas Project。

cuturl('http://cancergenome.nih.gov/index.asp')

The Cancer Genome Atlas (TCGA) is a comprehensive and coordinated effort to accelerate our understanding of the molecular basis of cancer through the application of genome analysis technologies, including large-scale genome sequencing.

通过对癌症病人的genome sequencing,希望发现相关的致病变异,其中主要包括SNP。Cancer Genome Atlas 的前期工作主要会集中对三种癌症的测序,包括 brain (glioblastoma), lung (squamous cell), and ovarian cancer.

相似在Breast Cancer和Colorectal Cancer的Genome Sequencing研究已经在去年的这篇Science文章上发表了, 不过不是Cancer Genome Atlas做的。
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The figures below show the basic principles of the process when using Wild Type (WT) Primers.
The FIP and BIP are designed to contain a SNP nucleotide (in this case of Wild Type allele) at 5' end, respectively.
Using the WT primers, when the target gene is the WT allele, DNA synthesis from dumbbell-like starting structure proceeds and the LAMP amplification cycling continues. In contrast, when the target gene is the Mutant (MUT) allele, no DNA synthesis proceeds from dumbbell-like structure and the LAMP amplification cycling dose not occur. Even if DNA synthesis proceeds in one step due to miscopy, the amplification reaction is either halted in other steps or is delayed since repetition of this reaction continually checks at each cycling step of the DNA replication.

顺便说一下,我可不是这个公司的~~~只是对这个感兴趣~~


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2011-8-15 17:22
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目前在帮师兄做SNP,但很多东西不清楚,看了你们的东西,受益匪浅.谢谢
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呵呵,snp的发展还不是要靠最好的检测技术来推动,最好的检测技术应该是simple,use-friendly,robust ,equipment-free,如果一项技术动不动就要昂贵的仪器,专业的技术人员操作,那关于它的研究也应该是很受限制的,科学的真谛最于用简单的方法去处理复杂的问题,反之则是偏离的。
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现在的研究方法最主要是可靠
我现在只认为经过大样本量验证的
技术才可以应用,本身snp的关联解析
就有很多假阳性,如果在参杂机器的因素
根本就不能有效的验证,最近的有人已经提出
要对关联分析得出的结果作详细验证。
不要因为节约几个费用而是整个项目失败
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我来介绍一下DHPLC吧:
用以检测T2DM的众多候选基因突变所需要的技术,既要求能够自动化、高通量进行,也要求除PCR之外,勿需进行PCR引物修饰、购买特殊试剂、检测标记信号或作其它的样品处理;而目前已有的许多DNA突变分析技术诸如单链构象多态性 (single-strand conformation polymorphism,SSCP) 、变性梯度凝胶电泳法(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)等均不能满足此要求。近年来建立并迅速发展的DHPLC是一种新型基因突变筛查技术,符合上述的要求,可用于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP),小片段缺失或插入等多种基因突变的检测。DHPLC具有高通量检测、自动化程度高、灵敏度和特异性较高、检测DNA片段和长度变动范围广、相对价廉等优点。与传统的SSCP 、DGGE等方法相比,DHPLC有较多的优点。SSCP的结果受血样质量、提取方法等因素的影响,并且需要跑胶、电泳;DGGE则需要标记引物,存在放射性污染,这两种方法都比较费时费力。而DHPLC则高度自动化,可以自动取样,检测每个样品只需要8分钟左右[3]。DHPLC与其他检测DNA突变方法的最大不同在于,它能够纯化DNA片断。当然,只能检测杂合突变是DHPLC的不足之处,但是这可以利用混合的方法(即将纯合突变样品和野生型样品混合)来解决。
其原理是:在部分变性的条件下,通过杂合与纯合二倍体在柱中保留时间的差异,发现DNA突变。异源双链DNA与同源双链DNA的解链特性不同,在部分变性条件下,异源双链因有错配区的存在而更易变性,在色谱柱中的保留时间短于同源双链,故先被洗脱下来,在色谱图中表现为双峰或多峰的洗脱曲线。
用DHPLC筛查突变的时候,要注意以下几个方面:⑴PCR产物要有高度特异性,以免用DHPLC检测时产生假阳性结果。可以使用pfu酶来代替Taq酶,以消除主峰前面那个由于使用Taq酶而出现的杂峰,避免出现假阳性。⑵退火温度的估算很重要。利用Navigator software计算出的退火温度通常能够筛查到大部分的突变,如果与δ螺旋等计算方法联合应用,来估算退火温度,将更加准确。⑶当筛查大样本量的时候,要注意经常用已知突变的样本来做对照,检测条件是否合适,以保证良好的重复性。只要保证以上几个方面,用DHPLC就基本可以筛查到100%的SNP以及插入/缺失片断突变。
以上是我论文的一部分,写出来跟大家分享。
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楼上你说的那个做snp的准确性不是很好
做大规模筛查还可以,还有就是每次必须调整好
一次就做了,重复性也不好
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