求助：为什么我抽提的全血DNA浓度这么低？ - 经验共享

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标题:求助：为什么我抽提的全血DNA浓度这么低？

小鼹鼠[使用道具]
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发表于 2011-8-19 15:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

28也可以了。血中基因组浓度就不是很高的。应该对您的下步实验影响不大。

小鼹鼠[使用道具]
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发表于 2011-8-19 15:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

28ng/ul这个浓度还是偏低了，我们的盒子做成成这样，肯定哪里出问题了。这个要澄清一下，如果确定是正常人新鲜全血，小量提取比如300ul，排除操作问题，用个我们盒子至少50-100ng/ul，这还算正常。

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发表于 2011-8-19 15:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

没用过这个盒子，但是全血的话这个浓度肯定是低了，100ng/ul没问题

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发表于 2011-8-19 15:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有没有可能lz的血来自用了免疫抑制剂的病人
淋巴细胞不多，浓度也就不会高了

小鼹鼠[使用道具]
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发表于 2011-8-19 15:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

没用过这公司的，不过我提人全血200ul能提出50-100ng/ul（50ul洗脱液）。所以我觉得艾德莱的那个技术支持没有吹嘘，还是打他们的技术支持电话吧。

小鼹鼠[使用道具]
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发表于 2011-8-19 15:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

去年我提了大量的DNA,摸索出一点经验，用的试剂盒跟你不一样，但是原理是一样的

根据自己的经验，你说的沉淀不溶解，肯定是蛋白沉淀了，不是DNA

用了300ul全血的量是不是足够，在裂解完红细胞后，离心看沉淀就知道了，如果在管底能看到一点白色的细胞沉淀就行了，下一步加核裂解液的时候一定要充分裂解白细胞层，我一般加的时候先用枪头捣捣，再加下去，充分吹打，一般不会产生大凝块堵住枪头，裂解的也比较充分

特别强调一点，有时候细胞量太多了，反而不是好事，裂解不充分，下一步离心的时候，DNA与蛋白沉淀离心分离不完全，反而会导致DNA提取量的低。

只要细胞量适中，核裂解完全，DNA与蛋白充分分离，基本就算DNA提取成功了

祝好运，多练习几次就能摸出经验了

小鼹鼠[使用道具]
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发表于 2011-8-19 15:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用酚，氯仿法提取全血DNA，冻存的血，操作Protocol经过自己优化后，产率基本上不低于20微克/ml全血，OD260/280值大部分分布在1.80-1.85之间，没有低于1.80的，也没有高于1.89的；OD260/OD230不低于2.20。

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