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标题:※※※电泳讨论专区※※※

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发表于 2011-8-21 09:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
难道我说得还不够清楚吗？都说两种可能了。不信的话，你有本钱，去测个序不就明白了。
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发表于 2011-8-21 09:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1. 取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.
2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.
3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.
4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.
显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.

这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.
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发表于 2011-8-21 09:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳技术概述


　　电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具 有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时，该蛋白质带负电荷， 在电场中向正极移动，相反则带正电荷，在电场中向负极移动，只有蛋白质溶液pH在 蛋白质的等电点时静电荷是零，在电场中不向任何一极移动。
　　电泳现象早在1890年就被发现，1907年有人曾在琼脂中电泳，研究白喉毒素； 1937年由Tiselius制成界面电泳仪，并开始用于蛋白质的研究。从此，人们才逐渐认 识到电泳技术对于生物科学研究是一种重要工具。然而，界面电泳结构复杂。价格昂 贵难于普及。1940年左右。以纸为支持物的电泳问世后，电泳技术得到迅速发展。
　　电泳技术以支持物分，可分为纸电泳，醋酸纤维素薄膜电泳，淀粉凝胶电泳，琼 脂（糖）凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳等。经凝胶形状分有水平平板电泳，园盘柱 状电泳及垂直平板电泳。各种类型的电泳技术概括如表。
类 别  名 称
用支持体的电泳技术  
1.纸上电泳
2.醋酸纤维薄膜电泳
3.薄层电泳
4.非凝胶性支持体区带电泳 （支持体有：淀粉，纤维素粉，玻璃粉，硅胶等)
5.凝胶支持体区带电泳 ①淀粉液 ②聚丙烯酰胺凝胶 ③琼脂（糖）凝胶
不用支持体的电泳技术  
1.Tiselius或微量电泳
2.显微电泳
3.等电点聚焦电泳技术
4.等速电泳技术
5.密度梯度电泳
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 小中大
表 电泳技术的种类
　　各类电泳技术已经广泛地用于基础理论研究，临床诊断及工业制造等方面。例如用醋 酸纤维薄膜电泳分析血清蛋白，用琼脂对流免疫电泳分析病人血清，为早期诊断原发 性肝癌提供资料：用高压电泳分离肽段，研究蛋白质一级结构：用高压电泳和层析结 合研究核酸的一级结构。凝胶龟泳技术在分离分析酶。蛋白质，核酸等生物大分子方 面具有较高的分辩力，为生物化学，分子生物学的发展作出了重大贡献。
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 小中大
琼脂糖凝胶电泳
　　在凝胶电泳中，首先应用的是琼脂电泳，它具有下列优点：（1）琼脂含液体量 大，可达98-99%，近似自由电泳，但是样品的扩散度比自由电泳小，对蛋白质的吸附 极微。（2）琼脂作为支持体有均匀，区带整齐，分辨率高，重复性好等优点。（3） 电泳速度快。（4）透明而不吸收紫外线，可以直接用紫外检测仪作定量测定。（5） 区带易染色，样品易回收，有利于制止备。然而琼脂中有较多硫酸根，电渗作用大。 琼脂糖是从琼脂中提取出来的，是由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多 糖。含硫酸根比琼脂少，因而分离效果明显提高。 　　琼脂（糖）电泳常用缓冲液的pH在6-9之间，离子强度为0.02-0.05。离子强度过 高时，会有大量电流通过凝胶，因而产生热量，使凝胶的水份量蒸发，析出盐的结 晶，甚至可使凝胶断裂，电流中断。常用的缓冲液有硼酸盐缓冲液与巴比妥缓冲液。 为了防止电泳时两极缓冲液槽内pH和离子强度的改变，可在每次电泳后合并两极槽内 的缓冲液，混匀后再用。
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 小中大
醋酸纤维素薄膜电泳
　　醋酸纤维素薄膜是由醋酸纤维素加工制成的。醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体 有以下优点：①电泳后区带界限清晰；②通电时间较短（二十分钟至一小时）；③它 对各种蛋白质（包括血清白蛋白，溶菌酶及核糖核酸酶）都几乎完全不吸附，因此无 拖尾现象；④对染料也没有吸附，因此不结合的染料能完全洗掉，无样品处几乎完全 无色。它的电渗作用虽高但很均一，不影响样品的分离效果，由于醋酸纤维素薄膜吸 水量较低，因此必需在密闭的容器中进行电泳，并使用较低有电流避免蒸发。
　　醋酸纤维素薄膜电泳已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋 白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电 泳低，但它具有简单，快速等优点。根据样品理化性质，从提高电泳速度和分辨力出 发选择缓冲液的种类，pH和离子强度。选择好的缓冲液最好是挥发性强，对显色或紫 外光等观察区带没有影响，若样品含盐量较高时，宜采用含盐缓冲液。例如血清蛋白 电泳可选用pH8.6的巴比妥缓冲液或硼酸缓冲液；氨基酸的分离则可选用pH7.2的磷酸 盐缓冲液等。电泳时先将滤膜剪成一定长度和宽度的纸条。在欲点样的位置用铅笔做 上记号，点上样品，在一定的电压，电流下电泳一定时间，取下滤膜，进行染色。不 同物质需采用不同的显色方法，如核苷酸等物质可在紫外分析灯下观察定位，但许多 物质必须经染色剂显色。
　　醋酸纤维素薄膜电泳染色后区带可剪下，溶于一定的溶剂中进行光密度测定。也 可以浸于折射率为1.474的油中或其他透明液中使之透明，然后直接用光密度计测 定。它的缺点是厚度小，样品用量很小，不适于制备。  
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 小中大
核酸凝胶电泳
自从琼脂糖（agrose）和聚丙烯酰胺（polyacrylamide）凝胶被加入核酸研究以来，按分子量大小分布分离DNA的凝胶电泳技术，已经发展成为一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段。同时也是现在通用的许多分子生物学研究方法的技术移速度叫做电泳的迁移率，它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比，也与电泳分子的大小、构型、形状等因素有关。核酸分子的磷酸基团带有负电荷，因此，当核酸分子被放置在电场当中时，它们就会向正电极的方向迁移，大小、形状、构型不同的核酸分子迁移率不同，因而在电场中被分离。
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 小中大
我提了质粒DNA，在PCR之前想看看分子量是否是我所要得，但出现一个问题，必须要和loading buffer按至少3：1，严重时1：1的比例上样才行，否则就会出现漂样。求助。
buffer没有问题，用来上marker5：1没问题。
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 小中大
10XTBE缓冲液的配制
　　Tris硷，108克
　　EDTA，9.3克
　　硼酸，55克
　　H2O至，1000ul
　　(其PH应为8.0～8.2)
　　临用时用水稀至0.5XTBE(20倍稀释.
+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++

请问：你是这样配制TBE的，如何溶解EDTA，我按照书上先配EDTA，确实需要调PH值，PH到达8，很快溶解。然后再将0.5M EDTA加入。
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我只用过TAE.。按分子克隆书来配的。上面的内容引子37℃网。
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