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标题:※※※电泳讨论专区※※※

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发表于 2011-8-21 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，DNA单链的迁移率除与DNA链的长短有关外，更主要的是取决于DNA单链所形成的构象。
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和测序仪器自动检测联合与可用于分离识别，辨读DNA而达到测序目的。
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发表于 2011-8-21 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢热情帮助，您的意思是如果做非变性胶，那么并不能判断DNA链的长短，还是做变性胶。能不能推荐一本关于这两者的详细区别的书，万分感谢。
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发表于 2011-8-21 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问各位老师：这电泳是怎么回事？

0.6%胶，最左为HANDIII MARKERS
不知道为何还在往后跑的。60V,2h

0.5的TAE，琼脂糖也是用0.5TAE配成0.6的，3V/cm,2h


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2011-8-21 09:32
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发表于 2011-8-21 09:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近电泳老是不稳定，这次跑电泳有带，下次就没有。郁闷。
TBE缓冲液换了，还是老毛病。
难到是琼脂糖和EB的问题？？
不明白。
请教各位，谢了。
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发表于 2011-8-21 09:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问大侠，做SSR时有人用变性电泳，有人说不用变性电泳也可以。上样时，有人说需要变性，有人说不变性。我不明白，这是为什么？按理说，SSR主要是长度的区别，不用变性样品，也不用作变性胶，就可区分长度的差异；况且样品变性后，成了单链，其迁移不是和SSCP一样，受构向的影响吗？请那位大侠指教，我最近一直为此问题睡不着觉。
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发表于 2011-8-21 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教！
我是新手，同学给我一个质粒，是病毒骨架质粒30kb；我分别用1％、0.5%、0.3％琼脂糖胶200伏跑一个小时后，没有结果；
请问：对于大片段质粒（30kb），电泳配制多大浓度琼脂糖胶、电压多少合适和估计多长时间可以看到条带？还有其它方法可以鉴定这个质粒吗？
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发表于 2011-8-21 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看来大家遇到的问题都差不多！
关于，胶面不平，好像是由于电泳时电压的问题，或者是电泳仪本身的问题，呵呵，跟具体的操作好像没关系。  
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发表于 2011-8-21 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问老大，做SSR时，一般说需要做加尿素的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，并且，PCR产物也要变性后才上样。我想SSR－PCR扩增产物条带较短，用聚丙烯酰胺胶是为了提高分辨率，可是我不明白为什么要做变性胶，PCR产物变性后，不是呈单链了，且可能会出现单链的二级结构造成构向变化，结果间如何比较？
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发表于 2011-8-21 09:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是个新手，也想请教高手们，是不是做微卫星多态性若要区分两个bp或四个bp就一定要把PCR产物也要变性后再加尿素的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，我现在没有这样就直接非变性PAGE，但一直也没结果，急盼高手指点，谢谢了！！
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 小中大
我有一个问题请教：
我从同学那里得到一个30多Kb的病毒骨架质粒，但多次摇菌小抽后电泳（分别用1％、8％的胶，电压200 v,时间30~60分钟）都看不到条带;同学用该质粒已经构建成功了，应该不是质粒的问题；难道是我的操作或方法有问题吗？请高手指教！
万分感谢！
实验顺利！
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