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标题:※※※电泳讨论专区※※※

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发表于 2011-8-21 09:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我说朋友们，你们都用什么软件分析凝胶结果啊？我的是核酸凝胶，不知道怎么分析，找了几个软件但是都不会用，强烈郁闷！！！
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发表于 2011-8-21 09:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们常用的是smartview的图像软件分析系统，比较好用的。
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发表于 2011-8-21 09:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我今天用PCR产物跑胶，我的目的片段大约是300bp，但除了300bp处外，在约100bp处也出现一条带，请教各位高手这条带可能是什么原因造成的，多谢！  
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发表于 2011-8-21 09:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 阿拉蕾 于 2011-8-21 09:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我今天用PCR产物跑胶，我的目的片段大约是300bp，但除了300bp处外，在约100bp处也出现一条带，请教各位高手这条带可能是什么原因造成的，多谢！   

1 查一下你的引物扩出的基因是否有亚型，如VEGF常有3 个亚型
2 是否混有RNA
我也只是探讨，请不要见笑
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发表于 2011-8-21 09:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不过我不明白为什么混有RNA会出现这种情况，请指教，多谢！
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发表于 2011-8-21 09:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我有个问题想请教一下：

我在做RT-PCR，有5个目的基因，如何在一个泳道上把这些目的基因都跑出来？有人告诉我两种方法：

1 把5对引物在一个管内一起做PCR （我的目的基因反应条件一样，单独均可跑出），然后电泳。但我只跑出2个目的基因，这种方法是否可行？

2 将5个分别批出来后，将其混匀后再跑电泳，应该可行。能否告知如何混匀，如何上样？我想做半定量，所以请详细告知。
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发表于 2011-8-21 09:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教不敢当，我也只是学习。不知你是否做的RT-PCR，我只是将我遇见过的这种情况说一下。
如果在做逆转录时加入的RNA量过大，逆转录后的cDNA可以不纯，电泳时可以出现约100bp的带
鉴别主要看带型：RNA带较宽，比较亮，一般不超过二、三百碱基；目的基因的带较窄，特异性较强，一般没有RNA带亮。
解决办法是逆转录时适当减少RNA 的量。不知对不对？
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发表于 2011-8-21 09:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 阿拉蕾 于 2011-8-21 09:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我有个问题想请教一下：

我在做RT-PCR，有5个目的基因，如何在一个泳道上把这些目的基因都跑出来？有人告诉我两种方法：

1 把5对引物在一个管内一起做PCR （我的目的基因反应条件一样，单独均可跑出），然后电泳。但我只跑出2个目的 ...

1.如果是同管扩增，因为引物之间有竞争，各基因的扩增效率不同，所以需要重新调整体系。你的基因比较多，都在一管里扩的话，估计调整会比较麻烦，所以不妨单扩每个基因，然后一起电泳。
2.等量混匀上样即可。
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发表于 2011-8-21 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
麻烦推荐加样的量，如果4个基因混的话，每个5微升，即20微升。加样有些困难，但取少量，带会不会很弱？
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 小中大
只能试一下了，胶灌的稍厚点，用宽齿的梳子。
是不是可以每个基因分别与看家基因比较，最后根据与看家基因比较的结果比较目的基因间的差异，这样电泳时只要两个基因就可以了，相对要容易多了。  
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