PCR仪

请教：
我最近在做电泳，使用的是PCR扩增的产物，出现了下列问题：
1， 有脱尾现象
2。条带弯曲
3。产物在电泳30分钟之前是一条带，但之后就是两条带，而且两条带很接近
望多多指教

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脱尾有可能是做PCR时模板过多所致.条带弯曲有两个可能性一是胶没做均匀,二是电泳缓冲液离子浓度高了.产物出现两条带,是因为本来就扩增出来了两条带,经过较长时间电泳分开了.

我想请教个问题，我用分子克隆上的碱裂解法提质粒后，跑电泳是经常是条带出不了孔，为什么？？

我提了质粒DNA，在PCR之前想看看分子量是否是我所要得，但出现一个问题，必须要和loading buffer按至少3：1，严重时1：1的比例上样才行，否则就会出现漂样。求助。
buffer没有问题，用来上marker5：1没问题。

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可能是质粒DNA的纯度不够高。

(2)是因为电泳过程中产热所至。有两种方法解决：一是降低电压，延长电泳时间，使单位时间内的产热量减少；二是在电泳槽外放两个冰袋，物理降温，电泳过程中可更换冰袋，效果也是不错的。
（3）我做变性PAGE时没有做过预电泳，结果也很好。可能对实验影响不大吧。

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预电泳的作用在于消除缓冲液前沿的影响。肯定有用。

1.如果是同管扩增，因为引物之间有竞争，各基因的扩增效率不同，所以需要重新调整体系。你的基因比较多，都在一管里扩的话，估计调整会比较麻烦，所以不妨单扩每个基因，然后一起电泳。
2.等量混匀上样即可。

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这种方法并不可行，理论上可以。如果用EB显色，前面的条带对后面的有很大的影响，谈不上定量。分开电泳是可以的。

我想请教个问题，我用分子克隆上的碱裂解法提质粒后，跑电泳是经常是条带出不了孔，为什么？？

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可能是操作有问题。找个有经验的老师带几次。没出孔的条带应该是细菌的基因组DNA.

由于每次样本量大，现在将电泳槽由原来的一次跑16个（共两排，每排8孔的）改为每排15孔一次两排的那种，还是用的一样的浓度的琼脂糖（3％）和电压（120V，1h），现在的电泳很难看见清楚的条带，常常是片状拖带，不知各位高手有没有什么好办法？
还有今天30多个样本的PCR后酶切的成果全毁了，除了上面的电泳原因，还有就是酶切后的片断是134，125，89，56，11，用了3％的琼脂糖也不能分开，我都快急死了，有谁支招没有？

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这么短的片断最好用变性的12％的聚丙稀酰胺凝胶电泳。

脱尾有可能是做PCR时模板过多所致.条带弯曲有两个可能性一是胶没做均匀,二是电泳缓冲液离子浓度高了.产物出现两条带,是因为本来就扩增出来了两条带,经过较长时间电泳分开了.

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先问清楚条带的位置再回答问题。这样说没有充分的依据。

新手，请指教，为什么我的琼脂糖凝胶电泳的条带总是会斜，是缓冲液的问题还是电泳仪的问题？？？？

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我说一个别人没说的原因：电泳槽不是水平的，不信试试看。