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标题:※※※电泳讨论专区※※※

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我是一名新手,可否告知将RNA提取出后进行RNA质量的检测所用的变性甲醛电泳该咋么做,所用的试剂该咋配,急!谢谢!
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看你配什么浓度的胶,例如配60ML 1%的胶, 称0.6G AGOROSE,加 60ML 1*TAE,跑胶时电泳槽中加1*TAE。
加DNA进孔时需加加样BUFFER,其中有溴酚蓝,甘油等。

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我的意见和你略有不同:别人问的是TAE电泳缓冲液的问题。
现回答该问题如下:
1 一般情况下,TAE的储存液为50×的。
2 agrose胶和电泳缓冲液的应用浓度应该一致。
3 通常的应用浓度为0.5×。
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请教主任,模板量多的话产生的目的片断大,是不是看起来象脱尾呢?
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别人问的是TAE电泳缓冲液的问题。
现回答该问题如下:
1 一般情况下,TAE的储存液为50×的。
2 agrose胶和电泳缓冲液的应用浓度应该一致。
3 通常的应用浓度为0.5×。

个人观点:TAE的储存液为10×或5×都可以,怎么方便实验怎么配制.
2 做agrose胶的buffer浓度和电泳缓冲液的浓度应该一致,且最好是同一批次的溶液,以保证他们的离子浓度一致.
3 通常TBE的浓度为0.5×,TAE一般都用1×.最好与自己的实验匹配
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我是一名新手,可否告知将RNA提取出后进行RNA质量的检测所用的变性甲醛电泳该咋么做,所用的试剂该咋配,急!谢谢!

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《分子克隆》上有详细的介绍。
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别人问的是TAE电泳缓冲液的问题。
现回答该问题如下:
1 一般情况下,TAE的储存液为50×的。
2 agrose胶和电泳缓冲液的应用浓度应该一致。
3 通常的应用浓度为0.5×。
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个人观点:TAE的储存液为10×或5×都可以,怎么方便实验怎么配制.
2 做agrose胶的buffer浓度和电泳缓冲液的浓度应该一致,且最好是同一批次的溶液,以保证他们的离子浓度一致.
3 通常TBE的浓度为0.5×,TAE一般都用1×.最好与自己的实验匹配


TAE用1×,如果是做凋亡检测,没错,因为凋亡得检测要跑得时间久,如果用于PCR产物分析,我觉得还是用0.5×得好,因为只要跑半个小时就可以了,0.5×(离子强度低)跑电泳同样电压跑得速度快。我以前跑凋亡都要2个小时以上。后来用于PCR产物分析,发现速度太慢了,而且很容易超过电泳仪得电流上限。改用0.5×得之后一切问题就都解决了。
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我是RT的新手,想请教各位:
我跑的胶,看家基因全是字形,目的条带有好几个是条带中间有一个空洞,反正就是像被中间挖了一块一样,到底是怎么回事啊!^ _^
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请问我跑胶时,有时候会发现所有的条带在一定位置后就动不了了,不论大小是多少都在一条线上,是否是因为胶不匀啊?
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我是RT的新手,想请教各位:
我跑的胶,看家基因全是字形,目的条带有好几个是条带中间有一个空洞,反正就是像被中间挖了一块一样,到底是怎么回事啊!^ _^

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1 制胶时把胶混匀。
2 加样时要让各试剂完全融化后再加。各泳道的样先点在薄膜上,用加样枪混匀后再加到泳道里。
试试看能不能解决你的问题。
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我把胶的浓度从1.5%降为1.0%, 换成全新的西班牙胶,煮胶应该没问题,倒胶我趁它还轻微冒热气就倒了(我怕有团块,倒完了胶马上插梳子,至少等一小时拔梳子,应该也没错。上样把样加在光盘上和BUFFER混匀,应该也是常用的方法。但反复作还是一样。后来一个师兄说我的看家基因上样量大了,目的条带上样量少了,照此作还是没有改观。有人说是缓冲液的问题(跑出弓形的条带好像是电压高所致),于是我换了缓冲液,也换了窄梳子,好像有上改观,但仔细看,看家基因还是有弓形的影子,而目的条带也隐约还有空洞。
再请问我下一步该如何作。
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