小中大太感谢了,教会了我很多东西。但是我一个基因6305个碱基,27个外显子,若设计全长的引物,primer就让我限定范围。这时我怎么选择呢?选择哪些碱基呢?谢谢!
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你可以选择靠3'端的碱基序列,比如选择靠3'端的3000bp,输入软件, 因为提RNA的时候,如果是试剂盒提的,有些试剂盒写的是通过polyT来吸附polyA的方法,纯化的,(不过不定每个都这样,而且如果trizol提的话就没有这个问题),另外,如果用的oligo dT做的逆转录引物,这样选择靠3'端的3000bp,即使RNA断了也还可以逆转录出来大部分