PCR仪

每次看见他们做的十倍稀释，还能做出很PERFECT的标准曲线，很是羡慕，但是在我周围没有人做的这么漂亮，所以一般以5倍或者2倍稀释，做出的图会好些，你可以试试。

我个人认为应该做模版cDNA和水的MIX，这样可以消除cDNA的差异；因为我们的目的就是检测cDNA的不同；而引物浓度是有一个范围的，各管之间引物浓度的差异影响比cDNA的差异要小的多得多。

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实时和常规的不同，实时一般是最后加模板，而常规是最后加酶，要是做模板和水的MIX，个人认为要对整个体系的把握比较好，但是体系对荧光信号是有影响的。可以通过减少水的体积来稳定体系。

谢谢楼主！还有一个问题想要请教，对于表达量的基因做标准曲线时有啥好的方法吗？

谢谢楼主！我打算试试2倍梯度稀释。

很有用。占个位子，以后提问

6，不同的管家基因扩增效率不同。所以在做整个实验之前应该做一次检测扩增效率的实验。如果扩增效率相差太大，就不能使用delt，deltCt法来比较基因表达量的高低。

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如何做检测目的基因和管家基因扩增效率的实验??有没有具体步骤?谢谢

如果按照标准的步骤是得做两个基因的标准曲线来看两者之间的斜率，差异在可信范围之内就认为两者扩增效率是一样的，但由于标准曲线制备要求很高，有个比较野的办法就是看两个基因的扩增曲线，如果指数期的扩增曲线平行，则我们可以认为两者的扩增效率相同。

如何做检测目的基因和管家基因扩增效率的实验??有没有具体步骤?谢谢

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您好
做目的基因和看家基因的扩增效率试验，严格要求是应该做两个基因的标准曲线，但是由于标准曲线的制备比较困难（纯度高的基因比较难获得）。所以很多人看两个基因的扩增曲线，如果两者在指数期的曲线平行，我们可以认为两者的扩增效率相同，但是条件比较好的实验室还是应该做标准曲线。