PCR仪

我想做醇脱氢酶（ADH）基因的表达检测，但ADH1与ADH2的基因序列有89%的相似度，请问各位高手：是否有办法通过设计不同的引物把2段基因中相似度较低的序列P出来，定量PCR？

  我设计过引物，好像ADH1与ADH2两条基因无法分开P出来，请大家解惑，谢谢！

这个当然可以，引物的上下游同时包含差异部分。

1.建议用探针法，设计引物理论上可以区别开差异。但是real-time引物质量还是有点要求的，很可能那仅有的差异序列不适合做引物（CT值低，TM低，有错配等等。）

2.探针法，比如：AB公司的Teq MAN 探针有一个专利，就是RGB小沟结合物（可提高局部TM）。因此它可以很好地区别差异序列，理论上13-18bp大小的探针序列中只要有2个碱基不同就能很好区分。杂志认可度高，方便今后投文章。

3.如果楼主没做过real-time。探针法的好处就更多了，你直接给序列给公司，公司一条龙服务。自己跑个PCR就好，省了实验设计阶段。

把引物的3端设计在两个基因有差异的序列上，不就可以区分了吗

手工设计引物，有的时候不能一味的相信软件。

谢谢解答！我用差异部分设计引物，但经过NCBI的primer-blast发现ADH1和ADH2两个基因都可能P出来，因为ADH1和ADH2两个基因序列实在太相似。

谢谢解答！我用差异部分设计引物，但经过NCBI的primer-blast发现ADH1和ADH2两个基因都可能P出来，因为ADH1和ADH2两个基因序列实在太相似。差异序列可能不适合做引物

谢谢解答！我是个初学者，还请多多指教

感谢楼主分享，受教了