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标题:【求助】EB染色的浓度和时间？

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发表于 2015-7-30 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】EB染色的浓度和时间？

本人做的是2％琼脂糖凝胶电泳，跑完电泳后用EB染色。国内外的多篇文献报道均用1ug/ml的EB染色，而我看大部分教科书上写的一般都是用0.5ug/mlEB染色。不知道其中有何区别？浸泡时间大概得多久？请各位高手指教。
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发表于 2015-7-30 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般我们不建议跑完电泳再染eb，一般都在制胶时加入EB。
不过跑完电泳染EB也可以，我们一般用1ug/ml在摇床上染，时间一般在10分钟－20分钟之间。
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发表于 2015-7-30 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

浓度对染色影响不是很大,1和0.5都可以的,不过建议还是按0.5(偶以前用0.5做过),至于时间,一般是30分钟到一个小时
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发表于 2015-7-30 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么非要电泳完染色呢，配胶直接加EB效果很好啊
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发表于 2015-7-30 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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我认为应该用1ug/ml,随着琼脂糖凝胶浓度的增大,一般超过2.0要用到EB染色,我用过后发现1ug/ml更好 ,带更亮,特异性更强,一般40-45分钟就比较好.
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发表于 2015-7-30 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

EB和核酸结合后在电泳过程中多少都会对核酸的电泳迁移产生影响，而先跑后染就不会有这种情况了，荧光染料在使用的过程中，在样品上样时要加入校正液就是因为它会改变电泳的迁移率（虽然不太大），需要校正液来校正。这在分子克隆里有说明。
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发表于 2015-7-30 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也来说说我的一些体会把，我们实验室一直都是电泳后再染色的，就按照分子克隆上说的0.5ug/ml的比例，如果是新鲜配制的电泳缓冲液，染色30分钟就可以了，染色时间过长以及EB的浓度过高都不大好，因为EB也会嵌入胶中没有DNA的地方，这样背景的颜色就会很亮，不利于观察呀！
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发表于 2015-7-30 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以在水里多漂一会，可以降低背景，EB会溶在水里的，这样就能去除背景了，另外有时在染色时EB会沉淀在加样孔里，使得加样孔特别亮，只要在漂洗时将胶翻个面，底朝上，EB就会从加样孔中流出，加样孔就不会那么亮了。
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发表于 2015-7-30 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位请注意生物安全性问题?EB直接在配胶是加入,合乎安全性吗?EB可是DNA变形剂。如果你还没有结婚养子，要替你的下一代考虑，一个染色问题没有必要太复杂了。跑了胶后0.5ug/ml的EB，或者小于0.5ug/ml的EB染液中染7分钟以上就足够了。实验时不要让EB染到身上了，保护好自己。
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 小中大

请问一下,EB是怎样发挥毒性的,通过什么途径,不接触到就可以了吗?
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