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标题:【求助】全血基因组DNA提取问题

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发表于 2015-8-1 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

基因组DNA 还是很好提的，根本不需要用什么试剂盒，1ml的全血足够了，提之前先用氯化铵溶血，然后分离出相对纯的白细胞，然后SDS/NaOH很容易就能提出来（具体步骤就不啰嗦了）。大了我不敢说，10kb还是有保证的。从你的电泳图可以看出，你的基因组DNA体的很差劲的，1000bp的都不多，另外你的电泳缓冲液可能也不行，连DNA ladder 都没有跑好，
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发表于 2015-8-1 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再啰嗦一句，所有的试剂盒都是根据最土的方法建立的，仅仅是加一些其他的物质而已，仅能对实验结果有些许的改善，不要指望他能提供多大的帮助，最多也是使用上节省时间和操作简便一些而已。如果你不搞科研，还是可以破财消灾的，呵呵（自己不会优化，只能如此)
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发表于 2015-8-1 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

土方法或者我用AXYGEN，原来也是国内的公司 被收购了 不错 我DNA,基因组，质粒，较回收都用他家的 便宜好用 还沾国际大牌
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发表于 2015-8-1 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是我前段时间提的DNA,其中4，7，14泳道没有加样，其他泳道都加样了，只有8个勉勉强强能看，其他的根本就什么也没有啊。
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发表于 2015-8-1 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
基因组DNA 还是很好提的，根本不需要用什么试剂盒，1ml的全血足够了，提之前先用氯化铵溶血，然后分离出相对纯的白细胞，然后SDS/NaOH很容易就能提出来（具体步骤就不啰嗦了）。大了我不敢说，10kb还是有保证的。从你的电泳图可以看出，你的基因组DNA体的很差劲的，1000bp的都不多，另外你的电泳缓冲液可能也不行，连DNA ladder 都没有跑好

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谢谢批评！只是我上面发的图不是DNA电泳图，我发的是用提出来的DNA做的PCR的图。因为有人建议我用提出来的DNA做做PCR看行不行！大家都说DNA很好提。我真是羞惭啊！刚才我又上传了一份我前段时间提的DNA电泳图。请指教！
我的缓冲液，呵呵，不是它的原因，是我的原因，我加的电压太小了，我们试验室的电泳槽是27cm的，我跑电泳时才加了60v电压。呵呵，marker没有跑完，而我看我的目的条带出来了，就没有继续！
不是不想用原始的方法提DNA，而是好多试剂也要自己买，一是怕麻烦，再者是怕提出来杂质多，影响后续试验！
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发表于 2015-8-1 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你照的图片又问题，可以尝试调调凝胶成像仪的光度对比。
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发表于 2015-8-1 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是说我没有出现条带的是因为光度比值没有调好吗？我当时调了，怎么样也没有。不过我采的图是挺丑的。下次一定注意！
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发表于 2015-8-1 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问：我对你的方法很感兴趣，能分享下吗？尤其对你能那么简便分离出较纯的白细胞。
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发表于 2015-8-1 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
天根用的离心柱的膜就是QIAGEN 的，所以肯定没有问题的！
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发表于 2015-8-1 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bgf5 于 2015-8-1 18:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
基因组DNA 还是很好提的，根本不需要用什么试剂盒，1ml的全血足够了，提之前先用氯化铵溶血，然后分离出相对纯的白细胞，然后SDS/NaOH很容易就能提出来（具体步骤就不啰嗦了）。大了我不敢说，10kb还是有保证的。从你的电泳图可以看 ...

酚/氯仿法提取血液DNA纯度是很高的，做PCR绰绰有余。
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