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首先，我认为引物设计的重要性要高于PCR条件的摸索；如果说你的这个PCR条件有什么要摸索的，我想，既然现在没有产物，那退火温度往低了调，先不管特异性，先有东西再说，有了产物，特异性不好，再考虑温度高一点，如果退火温度降下来也没有产物，那就要考虑试剂等原因了。
其次，不清楚你扩增的什么模板，看前面的帖子，应该是人基因组吧？我以前做过Taq酶质量控制，一般公司的普通Taq酶扩增人基因组到2k多大小的片段已经接近极限了，也就是说处于扩增出来和不出来之间，条件稍微不好就失败，所以Taq酶质量在你的实验中应该比较重要。
另外，引物我只是建议贮存液用TE溶，工作液如果也用TE溶，既要顾及到PCR体系中加入引物的体积，不能太大，否则引入太多EDTA，会螯合镁离子，抑制PCR。
最后，引物设计的好坏，可以用oligo6.0评价一下。
