小中大流式细胞仪测定DNA需要注意到小问题
近日DNA含量、调亡、细胞周期分析的得到的数据都不是很好，经过查阅资料，发现主要问题还在于前处理。
1、染色问题，染色加入足量的染料.以确保样木能与染料充分结合，PI的推荐浓度至少是20 ug/ 10的6次方个细胞。染色液过量与不足，均可造成分析背景过大。
2、由于PI也可以与RNA结合，因此应该用Rnase处理样品，一般的添加量大约是10的6次方个细胞加大约1000U的RNAase，通常将将染液和RANse配到一起，这个浓度也是要探索的，量不对，容易出现异常峰。
3、直方图道数与一倍体细胞的G1峰位置的选择，细胞数直方图的道数值至少应为512，G峰道数应不低最大道数的五分之一即当直方图的最大道数为1 024时.G，峰的位置应该是200.直方图的最大道数为512时.G，峰的位置应为1000通过调节PMT(光电倍增管)的电压值以获得正常一倍体细胞的G峰的理想位置，这点很重要，但是问题是样品的不均一性，细胞浓度不同，导致荧光强度不同，所以出现的值很不好，所以各样本间的细胞浓度值要尽量军均一，否则不能出现想要的图像。
4、一般来讲，收集细胞要在20000个以上，所以细胞悬浮液的量也要足够，在细胞浓度10的6次方个以上时，也大约要500微升。
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