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标题:【求助】提RNA过程影响纯度和质量的关键是否...

zzzz[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得提RNA的关键是Trizol的量要足，一般是10*6~10*7细胞加1ml Trizol，细胞数太多，Trizol的量相对就不足，裂解不完全，影响RNA的质量。一定要充分吹打混匀直至溶液澄清！！这时可以加氯仿往下做，也可以放在－20℃下冻存起来，到需要时再往下做，我放过一个多月再提RNA还是好的。另外加氯仿后要充分振荡混匀呈乳状，然后在室温下静置3~5分钟再去低温离心，分层都很明显，一般都有500~600μl的水相。后面的步骤就是沉淀、洗涤的过程了，最后用DEPC水溶解，按照程序来就ok了！加入异丙醇后也要在室温下静置10分钟再去离心比较好，也有的说在－20℃下静置，我试过，差不多，我感觉在室温下效果还要好一些！
......

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完全赞同。组织量令少勿多
RNA提取少不怕，就怕DNA污染
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zzzz[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问加异丙醇后,需要混匀吗?
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发表于 2015-8-3 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问：你们题mRNA时用的时那的EP管，在12000转时，出现破裂现象没？请问在那能买到好质量的EP管或者离心管？
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发表于 2015-8-3 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直用国产的离心管，但也没有你说的那种情况，我认为你那肯定是本管有裂隙等，你应该也是偶尔出现的吧。
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woshi[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加异丙醇后来回颠倒几次即可，不需特殊方法混匀
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发表于 2015-8-3 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天折腾了一下午，没提出来。郁闷。可能太少了
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33号[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的是冰冻在培养瓶的细胞，加入TRIZOL后我就用枪吹打数次, 然后间断振荡, 不知大家怎么做的?到底该怎么让其充分裂解呢?时间久了会不会不好啊？
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发表于 2015-8-3 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我主要做血浆的，加入TRIZOL后用枪吹打数次混匀，加入氯仿后上下颠倒数次就可，千万不可VORTEX,很容易不分层，再离心时间长也白费
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

给大家介绍用molecular research center 的TRI系列，比invitrogen的好的多，据说invitrogen是向它买的
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发表于 2015-8-3 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有时,提取一瓶细胞的RNA,用2ml Trizol,然后分2个EP管,同时做,但只有一管做出来,操作都是一样的,不知为什么.
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