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标题:【求助】荧光定量PCR扩增效率

二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位战友，是做相对定量的。
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any333[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是我的产物跑的胶，第2到4个道是内参，最右边两个是目的基因，请问这能不能算扩增效率一致呢？

......

===================================================================

1.这个是终点的结果，而且用OD值存在着信号非线性放大，不能直接用这个来比较。
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qhyu[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
扩增效率这个词是用来形容引物和模板结合及pcr反应的效率的。是反应本身的特质。
你的这个图里还有不同来源样品里模板量的差异。所以最终的结果是扩增效率和不同来源模板之间差异的综合结果。
所以是不能判定扩增效率，
比如也许你的引物结合也很特特异，pcr条件也不错。
但样品里模板量很少，导致扩增不要出来。这样不能说扩增效率不好。
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tudou85[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
从电泳亮度比较扩增效率恐怕太牵强了吧，那还不如看同一个基因的Ct值，对于同一个基因而言，Ct值越小，扩增效率越高，但是只能比较，而不能计算具体数值。

============================================================

嗯，确实很粗略，要算具体值现目前知道标准曲线法。。。等高人解答。。。
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any333[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tudou85 于 2015-8-5 15:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
从电泳亮度比较扩增效率恐怕太牵强了吧，那还不如看同一个基因的Ct值，对于同一个基因而言，Ct值越小，扩增效率越高，但是只能比较，而不能计算具体数值。

============================================================

嗯，确 ...

1.没有想到这个问题居然有很多人都在纠结。
2.如果是绝对定量，则是可以根据标曲的斜率来计算。
3.如果是相对定量，相对统一还是可行的。但是如果一定要算出扩增效率也不是不可以。
只要把待测的样品中的一个进行几次稀释，通过计算斜率就可以了，不用非得去作标曲。有兴趣的同学可以用公式来算下，其实高中生的水平就可以得到这个结论的，本质上是把相对和绝对杂合起来，关心斜率。
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我仔细研究了下Roche Lightcycler 480那台PCR仪的说明书，发现其实相对定量分为相似相对定量和准确相对定量，如果做相似相对定量是不需要考虑扩增效率的，它默认各个样本扩增效率都是2.0。这样可以将多个目的基因与同一个看家基因进行比较。
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蒲公英[使用道具]
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发表于 2015-8-5 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
必须得做标准曲线的
计算公式如下：
e=10-1/a-1
e为扩增效率
a为截距
......

======================

a应该为标准曲线的斜率
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