【求助】在纯化过程中哪一步能大量除去内毒素？ - 经验共享

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标题:【求助】在纯化过程中哪一步能大量除去内毒素？

bs4665[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

实在没辙了就过一步Q层析，或专门去内毒素的填料

ldh[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不知道你的蛋白是怎样的，一般低电导偏碱性pH下，用阴离子的流穿模式去除内毒素的效果非常好的。一般我们的样品经过这一步后，内毒素都及格。阳离子的结合模式也能较多的去除内毒素，但是比较关键的是你每步所用的器具都应该去内毒处理（包括称量试剂的）（干热或者碱处理）。你们内毒检测是怎样的？一般我们的检测缓冲液是检测不出来的，要是缓冲液都能检测出来，一般就是操作过程污染了，控好这些内毒基本就没问题了。

Ao7[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ldh 于 2015-8-5 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不知道你的蛋白是怎样的，一般低电导偏碱性pH下，用阴离子的流穿模式去除内毒素的效果非常好的。一般我们的样品经过这一步后，内毒素都及格。阳离子的结合模式也能较多的去除内毒素，但是比较关键的是你每步所用的器具都应该 ...

请问下在纯化过程中对水源有要求吗？是否非要用注射用水？我们一直用的是高纯水，内毒素<0.001EU/ml。

whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用的也是超纯水，但是内毒检测是没有的（低于试剂最低检测限），所以有点好奇你们的内毒检测是怎样操作

veiwu[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你每一步操作都留样检测一下内毒素，然后就知道你哪一步去除内毒素最多了。我记得我们有个产品亲和层析这一步内毒素去除最多。

Ao7[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用的也是超纯水，但是内毒检测是没有的（低于试剂最低检测限），所以有点好奇你们的内毒检测是怎样操作

===========================================================================================================

我们是用湛江安度斯的鲎试剂（凝胶法）灵敏度0.25EU/ml半定量检测，也用过显色法（Thermo的）定量检测。你们的试剂检测限是多少？

eor[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 Ao7 于 2015-8-5 16:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我们用的也是超纯水，但是内毒检测是没有的（低于试剂最低检测限），所以有点好奇你们的内毒检测是怎样操作

========================================================================================================== ...

看来都是差不多的，我们也是安度斯，但是这个灵敏度0.25的怎么能检测到小于0.001的结果呢（
即便是定量法鲎试剂最低检测限也是0.005 EU/ml吧）

8s5g[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

0.001是超纯水的出水标准不是我们检测的，我们定量检测PBS内毒大约0.03EU/ml

kulee[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

层析三部都能除去内毒素，考虑哈填料CIP、SIP是否有效

JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-8-5 16:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主的蛋白等电点较高的话，可以考虑使用阴离子流穿模式，对去除内毒素的效果较好

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