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标题:甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）

微笑的海豚[使用道具]
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发表于 2011-9-1 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #161 细水长流 的帖子

那你三次由没由打匀，比色皿用的是一样的进光面吗？我上次测，一样的比色皿进光面不一样，测的OD有不样！
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大猫[使用道具]
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发表于 2011-9-1 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
进光面是一样的,就是比色皿是黑色的,根本没法看见里面,我先在外面混匀在加进去测定行吗?我是稀释了35倍测的
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微笑的海豚[使用道具]
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发表于 2011-9-1 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是在外面混匀加进去，但我先拿蒸馏水清洗比色皿，拿稀释好得模板（我一般稀释100倍，便于计算）润洗一下，在测浓度！
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胖小妮子[使用道具]
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发表于 2011-9-1 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教大家一个问题,如果样品非常非常少的话,如何抽DNA,这样获得的DNA量,够修饰用吗?有什么方法能分析样品特别少的甲基化方法吗
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finger[使用道具]
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 小中大

回复 #165 胖小妮子 的帖子

DNA能达到1ug，就可以做修饰。提取DNA的方法都是一样的，提取后可以纯化，纯化的步骤各有不同。我使用的离心柱最少洗脱要50ul，少了不能完全洗脱。量如果太少，这种方法获得的DNA溶液会太稀。可参考分子克隆试验指南中关于DNA纯化的步骤。如提取的量不能达到1ug，不能修饰。
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胖小妮子[使用道具]
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发表于 2011-9-1 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢!
但是我的样品量实在太少了,我担心用常规方法抽提DNA,会损失太多!
有不有什么能抽得较纯的DNA,而DNA量损失又较少?
还有,我能不能直接加蛋白质酶K和SDS来裂解,然后取上清进行修饰?
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 小中大

回复 #167 胖小妮子 的帖子

不能直接用上清进行修饰，不知你的课题是否有相关文献可以参考，可以多查阅一下文献。
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胖小妮子[使用道具]
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发表于 2011-9-1 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢!
我课题在这方法没有相关的报道,都还处在摸索阶段,但材料来源太少,又珍贵,所以不容得我去浪费.
所以想听听各位大侠的意件.
那么说,我只能通过微量抽提DNA试剂盒提得大于1ug的DNA量,材能进行我后序的实验了,是吗?
还有,有没有除了亚硫酸氢盐处理后测序列的方法外,还有不有其它方法,能检测微量DNA的甲基化水平的方法啊?即,只要DNA,就能检测出的敏感方法.
谢谢了!
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发表于 2011-9-1 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼主。
我用的是美国chemicon公司的DNA修饰试剂盒(CpGenometm DNA modification KIT)，引物是参照文献的，结果现在就是扩增不出来。
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发表于 2011-9-1 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
测基因组DNA时，稀释1000倍后还能测出浓度么，因为我的DNA量不多只能加大稀释倍数。谢谢啦！！！
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