PCR仪

应该是非特异性条带，说明你的pcr没有成功

回答：你定的没有问题

各位战友，BSP刚做一个多月了，至今没什么结果，来这报个到，和大家一起学习！
我是从动物组织中提DNA 做BSP，有个问题，基因组酶切这一步许多PROROCOL说可有可无，我看一本甲基化电子书说基因组DNA最好酶切一下，不知道哪位前辈有切身体会？
我的实验不出结果，就试了试酶切，流程分享如下：
1。将过夜酶切产物用DDW稀释到500微升，加等体积的酚氯仿异戊醇，混匀，12000RPM ，5min,4度
2. 小心吸上清，加入等体积的氯仿异戊醇，混匀，12000RPM，5MIN,4度
3. 小心吸上清, 加入0.2 倍体积的醋酸铵和2倍体积的冰无水乙醇，4度，静置10min
4. 12000RPM ，10min,4度
5. 小心弃上清，70%乙醇洗DNA，室温10min ,挥发酒精
6。20微升TE或DDW溶解DNA，注意管壁，用枪头吸溶液吹洗几下

不知道各位酶切后纯化方案是什么？或许您对我的方案有疑义，欢迎批评指正！希望能与大家一起进步！

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本人也做过总DNA的酶切，采用的酶是甲基化敏感性内切酶MSP I ,Hpa II，
Hha I,但电泳证实未能将总DNA切断。不知道您是否遇到过这种情况？

我是新手，烦请各位高手详解MSP和BSP的区别。谢谢！

第二部分 亚硫酸氢钠修饰基因组DNA
如不特别指出，所用双蒸水（DDW）均经高压蒸汽灭菌。
1：将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul；
2：加5.5ul新鲜配制的3M NaOH；
3： 42℃水浴30min；
水浴期间配制：
4：10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色）
5： 3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要准确为5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。
6：EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。
7：加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。
8：50℃避光水浴16h。
一般此步在4pm开始做，熟练的话不到5pm即可完成，水浴16h正好至次日8am以后收，时间上很合适。
这一步细节：
1：基因组DNA的量不需十分精确，宁多勿少，因为在以后纯化回收步骤中会有丢失，且此方法修饰最多可至4ug。
2：所有试剂均须新鲜配制，所以配液的技术要过关，既要快，又要精确。
3：亚硫酸氢钠溶液呈强酸性，一定用碱将PH调制5.0，否则PH不合适会影响后续纯化吸收。
4：水浴最好达16小时，虽可以短至8小时，但后者修饰会有不完全。

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请问楼主以及各位高手我查了Sigma公司的产品目录，好像‘Sigma，S9000’是Sodium metabisulfite 即焦亚硫酸钠，而楼主所说的‘3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000）’是怎么回事呢？是不是焦亚硫酸钠加水生成亚硫酸氢钠呢？

大家好，我也是做肿瘤甲基化研究的，做的是粪便中提取DNA，然后做甲基化研究，用的是Qiagen的粪便Dna提取试剂盒，里面有很多的杂质（可能是细菌），提取后电泳，有一条很亮的，但是也有很多的其他小的条带，下一步要做亚硫酸盐处理，是否有影响，还有就是2ug的DNA怎么来判定，如果用分光光度计测浓度好像不准（有很多的杂质），用电泳的话如何判断浓度。毕业在即，实验刚刚开始，甚急，请高手指点。
下图是我提完DNA后做的电泳，应该不是降解了吧。请大家帮忙看看。