甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法） - 经验共享

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标题:甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）

@木木@[使用道具]
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401

发表于 2011-9-2 14:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位大侠，最近在做MSP，四个细胞株，结果三个细胞株是U有，M没有，一个是M和U都有，且M条带少亮些，我想问一下如果是细胞株，是不是不会出现部分甲基化的问题，而是假阳性？？

麻瓜[使用道具]
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402

发表于 2011-9-2 14:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教：做下来要多少钱

微笑的海豚[使用道具]
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403

发表于 2011-9-2 14:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大家好，我最近准备做甲基化，买的ZYMO的甲基化修饰试剂盒，但我从细胞中提取的DNA量仅为3-8ng/ul，量非常低，我看试剂盒要求的最佳量为200ng-500ng，且试剂盒要求体积为20ul，请问怎样处理一下啊？新手上路，指点一下吧。谢谢！

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你的起始细胞数量是不是很少？建议用全细胞处理的盒子就好。

阿拉蕾[使用道具]
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404

发表于 2011-9-2 14:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，楼主好像是抄袭网上的，其实我一直在做，这种方法纯化出来的DNA质量并不好，效率也不怎么高。没有promega的那个纯化试剂盒的同志，可以试试DNA提取试剂盒的柱子试试，效果差不多，我现在都不用了，直接QIAGEN的盒子，呵呵，好用，有甲基化的朋友一起探讨啊，我一直在做MS-HRM。

阿拉蕾[使用道具]
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405

发表于 2011-9-2 14:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主甲基化方面的知识很丰富，我想请教几个问题，因为本人做甲基化不是常规的MSP，而是使用MS-HRM的技术来做CpG岛甲基化的。
由于MS-HRM技术基于的是高分辨溶解曲线的变化来确定样本是否有甲基化，所以灵敏度很高。我在常规的亚硫酸氢钠处理出来的DNA样本来做MS-HRM，曲线不是很好。
我分析，在样本纯化回收过程中加入了糖原，使原来的DNA样本浓度失真，导致曲线杂乱，请问楼主，能不能在纯化时候不加入糖原，还有，糖原不加的话，会不会影响回收效率。

finger[使用道具]
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406

发表于 2011-9-2 14:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在使用QIAGEN的EpiTect Bisulfite kits的盒子在试，结果还可以。

HOT兔[使用道具]
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发表于 2011-9-2 14:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

急问野生型引物什么意思吗？怎样设计？