【求助】关于蛋白纯化的求助

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标题:【求助】关于蛋白纯化的求助

ha111[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
先天性卵巢发育不全综合征
最近在做中蛋白的纯化，由于上样液比较粘稠，而导致上样后填料结块、堵柱等问题，做小试的时候通过0.45ul的膜过滤后可以上样，但是过滤速度极慢，不适合放大。另外，该蛋白由大肠杆菌表达，然后由包涵体变性溶解，再没切得到的短肽。所以上样液中含有融合蛋白等大分子物质，导致上述问题。之前试过离子交换（source 30Q），不过滤可以直接上柱，但由于收率低，后面换用反相层析发现不过滤的话不能上样。想请问大虾们有没有什么方法可以降低上样液的粘度。感激不尽！

hyuu[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我以前做包涵体蛋白用DEAE柱效果挺好试过离心吗

dior[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有没有试过用个深沉过滤器过滤下？或许可以试试。

dior[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 ha111 于 2015-8-6 18:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相关疾病：
先天性卵巢发育不全综合征
最近在做中蛋白的纯化，由于上样液比较粘稠，而导致上样后填料结块、堵柱等问题，做小试的时候通过0.45ul的膜过滤后可以上样，但是过滤速度极慢，不适合放大。另外，该蛋白由大肠杆菌表达，然 ...

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粘度大是不是因为核酸，匀浆不完全吧

woshi[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以考察一下目的蛋白的热稳定性，如果比较耐热，可以试试加温沉淀杂质
核酸，脂类的存在也会大大的影响样品粘度

ha111[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 dior 于 2015-8-6 18:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相关疾病：
先天性卵巢发育不全综合征

粘度大是不是因为核酸，匀浆不完全吧

现在已经试过很多填料，可以肯定的一点：不是粘度的问题。我们的东西是直接由包涵体变性溶解之后酶切得到的一条短肽，再上层析柱；现在就是层析柱放大不了，且小柱子上过一次之后再上第二次会出现堵柱，裂柱；可能是由于有一些不明杂质挂在柱子上面洗不下来。试过碱洗，尿素，盐酸胍等都洗不下来。

ha111[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 dior 于 2015-8-6 18:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
有没有试过用个深沉过滤器过滤下？或许可以试试。

相关疾病：
先天性卵巢发育不全综合征
过滤试过，没用！0.45um

ha111[使用道具]
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小中大

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我觉得应该是酶切之后，溶液里面有融合蛋白的缘故，因为我的短肽是接在融合蛋白上表达的！有什么办法能将其除去吗？谢谢

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不知你用的融合蛋白是什么？如果能用亲和层析的方法把融合蛋白去除，可一步获得切割后的目标多肽

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-8-6 18:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以考虑一下陶瓷膜超滤，应该效果不错

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生物制药

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