生物制药 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】离子交换的再生

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】离子交换的再生

youyou99[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75216
精华 0
积分 583
帖子 765
信誉分 100
可用分 4756
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
21
 


QUOTE:
原帖由 yhz1973 于 2015-8-7 10:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

每次生产过程中需要用高浓度的NaCl再生,生产结束后需要用NaCl再生,然后再用0.5M NaOH消毒。谢谢

生产前不使用NaOH去内毒素吗?
顶部
笨鸟321[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75369
精华 0
积分 188
帖子 115
信誉分 100
可用分 1321
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
22
 
确实见过很多人这样操作的,高盐再生或者预平衡,平衡液平衡,上样、洗杂、洗脱,高盐再生,0.5M NaOH是消毒(Clean)。
附:
All cation-exchange chromatography runs were conducted as the following
procedures: Columns were equilibrated with 2 column volumes
(CVs) of preequilibration buffer (equilibration buffer with added 1 M
NaCl) and 2 CVs of equilibration buffer in tandem; columns were then
loaded with protein solution and followed by 2 CVs of equilibration buffer
as postload wash; a linear gradient elution was performed from 0 to 100%
elution buffer in 10 CVs; after that, columns were regenerated with preequilibration
buffer and cleaned with 0.5 M NaOH plus 1 M NaCl; and columns
were stored with 0.1 M NaOH at room temperature. All runs were
performed at room temperature and the flow rate was 180cm=hr.
但是我不是太明白3个问题
1,如果消毒后保存在0.1M NaOH中或者乙醇中,下次使用前是不是要先用水冲洗后,才是高盐预平衡或平衡,水冲洗前是否还需在0.5M NaOH先冲一下;
2,使用起始的时候为什么一般都采用高盐再生或者预平衡一下,这样的目的是什么?因为后面不是平衡液还要平衡的么,是为了离子能快速平衡还是其它目的。
3,最后NaOH去除杂质能力很强,那是否还需要高盐再生一下呢。
顶部
yhz1973[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79832
精华 0
积分 439
帖子 538
信誉分 100
可用分 3540
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
23
 


QUOTE:
原帖由 youyou99 于 2015-8-7 10:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

生产前不使用NaOH去内毒素吗?

这个肯定要的啊,我现在说的是CIP和SIP的问题 呵呵
顶部
yhz1973[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79832
精华 0
积分 439
帖子 538
信誉分 100
可用分 3540
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
24
 


QUOTE:
原帖由 笨鸟321 于 2015-8-7 10:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
确实见过很多人这样操作的,高盐再生或者预平衡,平衡液平衡,上样、洗杂、洗脱,高盐再生,0.5M NaOH是消毒(Clean)。
附:
All cation-exchange chromatography runs were conducted as the following
procedures: Columns were e ...

回答1:填料的准备工序就是消毒处理→注射用水冲洗→平衡缓冲液平衡;适合所有的填料
2:用高盐平衡后再用平衡缓冲液,就是为了能快速置换离子
3:如果你的再生峰不需要收集的话,个人觉得没有必要再用高盐再生了,可以直接一步用NaOH消毒
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
25
 


QUOTE:
原帖由 yhz1973 于 2015-8-7 10:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

回答1:填料的准备工序就是消毒处理→注射用水冲洗→平衡缓冲液平衡;适合所有的填料
2:用高盐平衡后再用平衡缓冲液,就是为了能快速置换离子
3:如果你的再生峰不需要收集的话,个人觉得没有必要再用高盐再生了,可以直接一步用 ...

1,每次做都要消毒吗,GMP方面考虑,我如果连续生产,上一个生产周期NaOH消毒后已在低浓度NaOH中保存,如果连续生产,能否不再使用前消毒,是否可行,必定我可以规定个时间长度,当然我觉得时间长的话肯定应该使用前消毒,重新装柱或者每次新装应该做个消毒处理。
2,高盐平衡这个有道理,确实是这样。
3,再生峰不收集,但是我的理解是这样的,因为每个步骤中需要两次上样,我先第一次上样-洗脱后结束,再生,不NaOH处理,直接平衡,下一次上样-洗脱后结束,不再生了,直接用NaOH处理后保存。
顶部
yhz1973[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79832
精华 0
积分 439
帖子 538
信誉分 100
可用分 3540
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
26
 


QUOTE:
原帖由 u234 于 2015-8-7 10:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1,每次做都要消毒吗,GMP方面考虑,我如果连续生产,上一个生产周期NaOH消毒后已在低浓度NaOH中保存,如果连续生产,能否不再使用前消毒,是否可行,必定我可以规定个时间长度,当然我觉得时间长的话肯定应该使用前消毒,重新装柱或者 ...

1、消毒应该是每批生产前后都需要的,毕竟要保证杂质的清除;而且就算每次都消毒了,还得看消毒的效果随着时间和使用次数的增加有没有衰减
3、如果一批生产过程中同一个填料需要分两次纯化,这种情况下中间一次可以不做NaOH处理,生产结束后再进行NaOH消毒处理
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
27
 
恩。在处理有大量杂蛋白挂柱而且结合很紧的话,直接进NaOH是比较容易出现板结的情况。以前就遇到过那样的情况,做完直接用NaOH做CIP当碱进去不久后反压剧增,卸下柱头后发现上面的胶板结得用棍子都戳不烂,当场就蒙掉了。。。后来用3M的热碱处理才恢复

==================================================================================================

板结或者成块的理论道理是什么的?杂蛋白变性后与填料交联还是什么原因,如果板结后如何规范处理,3M热碱处理是否得当。
顶部