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标题:[讨论]做完荧光定量后如何统计数据

微笑的海豚[使用道具]
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说了这么多,我觉得还是没有人把如何统计最后结果说明白?
比如这个吧,文献中对照组都是用(1+-标准差)表示的,可是123三个对照组的均值根本就很难是1,除非凑巧是1,那好办了。

有人给解答一下么?

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用2-ddtCT统计。
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红豆冰[使用道具]
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请教版主:您说“一般而言,荧光定量PCR在无须得到精确的数值时是可以采用2的-ΔΔCT幂次方计算进行简便计算。但是前提是两者的扩增效率应该一致。所以在引物设计和片段的扩增长度应该大致一样,约50-150bp左右。一般实验室中对于荧光定量PCR做多个片段扩增,为省钱采用sybr green方法,这只是相对粗略计算,完全可用sybr green方法代替探针精确定量。 ”那如果我扩的产物片段长度不一致,那么用sybr green检测时应该怎么处理呢?因为我扩的是两个基因的融合体,这个融合体有好几种亚型,长度都不一样。谢谢您指点!  
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旋转木马[使用道具]
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我想请问一下,我要做不同组织间同蛋白表达的相对定量.可是我发现我选的内参GAPDH在不同组织间的表达量不同,那还可不可以做为内参啊?
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小蜜蜂[使用道具]
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呵呵,好贴应该顶上去,我最近也在统计数据,用双标准曲线法做的相对定量,不过不知道用什么统计方法?大家有没更具体的步骤?
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小蜜蜂[使用道具]
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呵呵,好贴应该顶上去,我最近也在统计数据,用双标准曲线法做的相对定量,不过不知道用什么统计方法?大家有没更具体的步骤?
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@花开花落@[使用道具]
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我也是用双标准曲线法做的相对定量,之后应该如何统计呢???
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大虾米[使用道具]
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我想请问一下,我要做不同组织间同蛋白表达的相对定量.可是我发现我选的内参GAPDH在不同组织间的表达量不同,那还可不可以做为内参啊?

很明显不可以。如果你找不到很合适的单参照基因,最后尝试多个参照基因的组合来作为你的参照标准。
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胖小妮子[使用道具]
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呵呵,在百度或者GOOGLE上打入:2的*次方,自动出结果,(*^__^*)
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许愿精灵[使用道具]
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待测样本基因表达差异分析原始数据

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我最近在做Real-time PCR 相对定量基因表达,我用的是AppliedBiosystem 公司的机器和软件,我有一个问题想请教您一下:
比如我做不同时间点 0h, 3h,6h, 24h 的某个基因表达量的相对变化,也就是说以0h为calibritor, 3h,6h, 24h 相对0h 的变化量。一般每个时间点设三个重复,但是三个重复的样品的值不可能是完全一样的,有时候差异还很大,在分析时是选 0h-1, 0h-2, 0h-3 三个样品中的一个作为calibritor , 也就是设它的值为1,其它两个的值可能大于1 也可能小于1 ,假设0h-2为 0.7 ,0h-3为1.2, 那么,如果我选0h-2 为calibritor , 也就是设它的值为1,那么实际上其它所有样品的相对值都升高了,同样,如果选0h-3 为calibritor , 也就是设它的值为1,那么实际上其它所有样品的相对值都降低了。那么我的问题是到底选哪个作为calibritor 呢。多谢了!
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大虾米[使用道具]
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3个里面剔掉一个差的最远的,剩下的2个取平均值
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