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标题:【求助】工作细胞库变更

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表1 使用Authentikit系统检测不同种属同功酶
G6PD、LDH、MDH和NP的迁移距离

限制性酶切图谱分析(restriction digest analysis):
首先,使用商品化试剂盒或其它方法提取细胞基质的基因组DNA,一般要求细胞数在2~5×106细胞,并进行核酸定量,然后进行限制性内切酶的消化,再进行琼脂糖电泳观察电泳条带的特点。这种方法可操作性较好,灵敏度较高,不仅可以鉴别细胞种属,对于细胞间交叉污染的检测也是相当灵敏的,但是公认具有种属特异性的内切酶的选择是本方法的关键。
下表2是文献报道的不同种属的细胞系经内切酶ECoRⅠ、HinfⅠ和HaeⅢ 进行消化反应后的电泳片段特征:
表2 不同种属动物细胞基因组限制性酶切分析结果

*, 来自同种属的至少5个细胞系的平均值
?, 与灵长类细胞系的0.7Kb片段分子量有微小区别
FB, 只有模糊的条带
NBD, 没有检测到条带
D, 在大致相同的分子量有两条带.
粗体数字表示该条带显色最深
随着分子生物学技术的发展,许多新的技术方法也开始应用,如种属特异性的β-球蛋白或其它特征性基因片段的PCR方法、DNA指纹分析、HLA表面抗原鉴定试验等。这些方法的检测灵敏度和特异性均较前有所改进,但其可操作性如何,还需要进行不断地实践。
由于不同的细胞鉴别试验方法具有不同的检测特性和灵敏度,因此应结合具体细胞的固有特性进行适宜的组合和选择,但最终应以实现正确鉴别为目的。
参考文献:
1.GN Stacey, H Hoelzl, etal. Authentication of animal cell cultures by direct visualization of repetitive DNA, aldolase gene PCR and isoenzyme analysis. Biologicals,1997,25:75-85
2.Klaus G, Corinna Meyer, etal. A simple method using β-globin polymerase chain reaction for the species identification of animal cell lines-a progress report. In Vitro Cell. Dev. Biol.-Animal,39:468-475
3.国家药典委员会编,中华人民共和国药典三部,化学工业出版社,2005,14-18
4.Hukku B, Halton DM, Mally M, etal. Cell characterization by use of multiple genetic markers. Adv Exp Med Biol. 1984,172:13-31
5.Steube KG,Steube KG, Meyer C, Uphoff CC, Drexler HG. A simple method using beta-globin polymerase chain reaction for the species identification of animal cell lines--a progress report. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2003, 39(10):468-75
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上面是cde的一篇电子期刊,供参考。
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shanzhapia696[使用道具]
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这个表格来自哪里?谢谢。

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CDE的指南文件
网站发布日期        20080904
起草日期        2005
状态        颁布
分类        生物制品
标题        生物制品生产工艺过程变更管理技术指导原则
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rxcc33[使用道具]
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观点有所不同。
原有库用完,按既定的工艺重新制备新的工作细胞库,不应该是变更,而只是生产工艺的一部分。
工作细胞库即物料,不同的工作种子批类似 化药生产的同一厂家不同批次的物料。因此,应该是:
既定工艺重新制备——既定方法检验——放行 无需备案。
(相关国外法规没找到)
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gogo[使用道具]
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备案应该是到省局安监处?
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duoduo[使用道具]
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观点有所不同。
原有库用完,按既定的工艺重新制备新的工作细胞库,不应该是变更,而只是生产工艺的一部分。
工作细胞库即物料,不同的工作种子批类似 化药生产的同一厂家不同批次的物料。因此,应该是:
既定工艺重新制备——既定方法检验——放行 无需备案。
(相关国外法规没找到)
......

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貌似你说的也有道理,但貌似不能延伸理解。
那主库也是同样的道理啊,就是主库用完了,原方法制备-检验放行。工作库用完了,原方法制备-检验放行。
但原始库如果也这么理解也可以啊,我按照原来的方法构建重组菌,同样的方法建立原始库,检验放行。这是原始库这样的风险大而已。理论上都可理解,但我感觉不能延伸啊。
按照既定工艺制备是否就能保证种子一致,如果这样理解工作细胞库,就可以同样理解主库及原始库。
还是只有工作种子库这样理解,主细胞库或原始库不这么理解?
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yhz1973[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 duoduo 于 2015-8-8 16:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
观点有所不同。
原有库用完,按既定的工艺重新制备新的工作细胞库,不应该是变更,而只是生产工艺的一部分。
工作细胞库即物料,不同的工作种子批类似 化药生产的同一厂家不同批次的物料。因此,应该是:
既定工艺重新制备——既 ...

若法规有规定,不能变通。
我的观点,工作细胞库可以。因为我已经按既定工艺进行过。
原始细胞库, 重新构建, 那就重新申报。 菌种的变化你不能控制,你只能做到鉴定基因序列,及最后成品鉴定,不能做到菌种的全部的对比。拷贝数、插入位点、重组过程中的变化你难以控制,不能知晓对宿主的潜在影响。
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quiqui008[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 yhz1973 于 2015-8-8 16:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

若法规有规定,不能变通。
我的观点,工作细胞库可以。因为我已经按既定工艺进行过。
原始细胞库, 重新构建, 那就重新申报。 菌种的变化你不能控制,你只能做到鉴定基因序列,及最后成品鉴定,不能做到菌种的全部的对比。拷贝数 ...

最近和几个检查组专家探讨过这个事,包括他们看国外的观点。
工作细胞库按照既定的工艺制备,带来的隐患比较小,是按照既定工艺制备,所以一般不认为是变更,但是启用新的一批的工作细胞库后需要对变化前后的产品进行加速和长期稳定性的比较,3个批次。
主细胞库如果全部用光,从原始细胞库制备,即使也类似是工作细胞库的新制备,但是带来的隐患非常大,一般不认为是简单按照既定工艺制备,也可以理解为不算变更,但要严肃对待,基本上就是按照工艺变更对待的,对产品进行全面的结构确证、3个批次对加速或长期稳定性进行全面对比研究。
原始细胞库如果没有了,那只能是重新申报,这个好理解。
关于申报或者备案通路,国内法规不完善,但是企业要做好对比研究。
国外Amgen公司的一个貌似是EPO主种子库发生过变更,主要是贴壁细胞变为悬浮细胞,这个肯定是变更,最后都要求重新做一个III期临床。
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quiqui008[使用道具]
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工作细胞库说的有道理,一般是多长时间建一次工作库(是否有有效期)还是用完了建的?
有没有重新建立过主细胞库?是怎么对待的。
原始库如果没有了,必须重新构建,那就是重新申报。
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eric930[使用道具]
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原帖由 quiqui008 于 2015-8-8 16:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
工作细胞库说的有道理,一般是多长时间建一次工作库(是否有有效期)还是用完了建的?
有没有重新建立过主细胞库?是怎么对待的。
原始库如果没有了,必须重新构建,那就是重新申报。 ...

有专家说,工作细胞库一般不规定有效期,一般用完了再建新库。置于新库制备的间隔时间,感觉和实际生产挂钩吧。菜鸟个人看法。
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