小中大表1 使用Authentikit系统检测不同种属同功酶
G6PD、LDH、MDH和NP的迁移距离
限制性酶切图谱分析(restriction digest analysis):
首先,使用商品化试剂盒或其它方法提取细胞基质的基因组DNA,一般要求细胞数在2~5×106细胞,并进行核酸定量,然后进行限制性内切酶的消化,再进行琼脂糖电泳观察电泳条带的特点。这种方法可操作性较好,灵敏度较高,不仅可以鉴别细胞种属,对于细胞间交叉污染的检测也是相当灵敏的,但是公认具有种属特异性的内切酶的选择是本方法的关键。
下表2是文献报道的不同种属的细胞系经内切酶ECoRⅠ、HinfⅠ和HaeⅢ 进行消化反应后的电泳片段特征:
表2 不同种属动物细胞基因组限制性酶切分析结果
*, 来自同种属的至少5个细胞系的平均值
?, 与灵长类细胞系的0.7Kb片段分子量有微小区别
FB, 只有模糊的条带
NBD, 没有检测到条带
D, 在大致相同的分子量有两条带.
粗体数字表示该条带显色最深
随着分子生物学技术的发展,许多新的技术方法也开始应用,如种属特异性的β-球蛋白或其它特征性基因片段的PCR方法、DNA指纹分析、HLA表面抗原鉴定试验等。这些方法的检测灵敏度和特异性均较前有所改进,但其可操作性如何,还需要进行不断地实践。
由于不同的细胞鉴别试验方法具有不同的检测特性和灵敏度,因此应结合具体细胞的固有特性进行适宜的组合和选择,但最终应以实现正确鉴别为目的。
参考文献:
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