小中大我们原来也是有这样的打算,可是这样是不能消除在融解曲线的杂峰的,只能在扩增曲线的时候可以这么做。
因为当你做融解曲线时,它是从低温到高温每间隔一温度(如0.5C)采集一次荧光信号的,因为杂峰及二聚Tm值都比产物的低,在升温的过程中,它比产物先采集信号,所以还是不能避免的。
出现这样的情况只有通过优化反应体系来解决!
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在延伸后加了升温低于目的片段的Tm但高于PDs的Tm值,持续5 s的步骤,荧光定量PCR仪在每个循环的最后几秒检测荧光信号,故信号在此时被检测,可以有效的消除PDs对荧光信号的影响.扩增曲线上可以消除PDs,溶解曲线上就不知道了,我也没试过,但是能让结果准确就行了.问一下,读版是什么意思?