小中大你的问题,我在培养中也曾碰到,当细胞特别少的时候,离心法彻底更换培养液,反而会越来越糟。可能细胞增殖需要合适的微环境,细胞之间会“团结协作”相互促进,例如分泌生长因子等。如果不断换液,就会打破良好的氛围,我的经验是细胞浓度低于10万/ml,可以将培养瓶“直立”放置(仅限于悬浮生长的细胞,如淋巴细胞),在瓶底浓缩细胞。倍倍稀释法换液比较好,保证细胞微环境变化不大。
另一个变糟的原因是,离心会增加污染机会。
还有,每次离心,来来回回“倒腾”细胞的时候,会有10-20%的细胞损失。
当然,细胞浓度增大后,代谢废物多了,还是要离心换液。但这时“丢”细胞已经不是主要问题了。
希望你的细胞也能快快长