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标题:【讨论帖】看图说细胞-状态好坏鉴别

DCS[使用道具]
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我们的配方是: (2x1000ml)
RPMI Medium 1640, 10.4g, 2x1袋
L-Glutamine, 2mmol/L, 2x300mg
2-Mercapto-ethanol, 50umol/L, 2x3.9ul
Pyruvic acid, sodium salt, 1mmol/L, 2x110mg
Hepes Free acid, - 2x1.5g
Sodium bicarbonate, - 2x1.5g
Gentamyoin sulfate injection,50 U/ml, 2x50000 U
DDW ==>2x1000ml
pH ==>7.2
立即,0.22um 滤菌==>高压==>4度密封保存
用前加10%NBS。
一到两个月,需要往保存的1640中加原量的L-Glutamine(分解了)。
我们的前辈,是个超级细胞高手,强烈推荐所有试剂都用进口的(特别是前四个)。
我们用的很好,不知在你们那怎样,试试吧。
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dhpbj[使用道具]
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我们的配方是: (2x1000ml)
RPMI Medium 1640, 10.4g, 2x1袋
L-Glutamine, 2mmol/L, 2x300mg
2-Mercapto-ethanol, 50umol/L, 2x3.9ul
Pyruvic acid, sodium salt, 1mmol/L, 2x110mg
Hepes Free acid, - 2x1.5g
Sodium bicarbonate, - 2x1.5g
Gentamyoin sulfate injection,50 U/ml, 2x50000 U
DDW ==>2x1000ml
pH ==>7.2
立即,0.22um 滤菌==>高压==>4度密封保存
用前加10%NBS。
一到两个月,需要往保存的1640中加原量的L-Glutamine(分解了)。
我们的前辈,是个超级细胞高手,强烈推荐所有试剂都用进口的(特别是前四个)。
我们用的很好,不知在你们那怎样,试试吧。
......

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注意:一般用0.22um滤膜滤过后,已经达到无菌要求,不需要高压的。
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fox_79[使用道具]
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不能高压,一高压那些营养成分都变性了。一般在无菌状态下经滤膜除菌就行。
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yizhi[使用道具]
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不错!不错!
收获很大!可以拿出来当样板给初学的看图学养细胞了。
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ero11[使用道具]
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合适的离心速度和时间!
不要携带太多的分离液!
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langlang[使用道具]
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我看了你的图,很好很好,记得以前我也见过这样的情况,可惜没有楼住这样敬业,把照片都贴出来了,辛苦了,建议加分!!!!!!!
实验最基本的是细胞培养,最关键的也是细胞培养,我也在养人 T细胞,是我自己的细胞,看者它们生长,就象看者自己的孩子一样,呵呵。毕竟是从自己身上抽出去的,不想它们就象照片上那样,变的面目全非啊。
希望能和楼主互相交流,多多指教啊。
......

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你好,能否请教一下人T细胞如何培养吗?我也准备养,但不知如何做准备。
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queen[使用道具]
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我想请教一个问题,对于悬浮生长的细胞,在培养方面,是细胞浓度高些还是细胞浓度低些对细胞状态、增殖有利呢?
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luoliqiong[使用道具]
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干得好!细胞培养这种事情本来就是需要我们平时多下点功夫,经验的积累才能培养出真正的本领!,加油哟,各位!
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QUOTE:
原帖由 queen 于 2015-8-10 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我想请教一个问题,对于悬浮生长的细胞,在培养方面,是细胞浓度高些还是细胞浓度低些对细胞状态、增殖有利呢?

我个人的经验,如果是增殖很快的肿瘤细胞胞系,如Raji等,当细胞处于少量增殖期时,状态比较“稳定”。“稳定”是指细胞基本同步化,处于同一细胞周期,大小、折光性、颗粒性、膜表面分子,都比较钧一。
更重要的是细胞膜强度大——若在快速增殖期,细胞极度膨胀,成为“超级大个头”,胞膜为了迎接即将到来的“重新分配”,变得很柔弱,就像孕妇的“肚皮”,十分松弛,经不得碰撞!——离心,洗涤,振荡,重悬对细胞都是很严重的“冲击”。
不知到其他各位有什么经验,一起交流交流吧。
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NBA[使用道具]
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一看名字就知,pbmc定是淋巴细胞方面的“高手”,有什么绝招,分享分享。
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