【讨论帖】看图说细胞－状态好坏鉴别 - 经验共享

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标题:【讨论帖】看图说细胞－状态好坏鉴别

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发表于 2015-8-10 16:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 sistis 于 2015-8-10 16:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
Raji细胞的培养除了1640里的谷氨酰胺，是否还需加大谷氨酰胺的量，如果需要，这个量又该加多少？另：在哪可以买到这种谷氨酰胺？
谢谢！！

我在前面详细写过，这里再贴一次不吧
我们的配方是： (2x1000ml)
RPMI Medium 1640, 10.4g, 2x1袋
L-Glutamine, 2mmol/L, 2x300mg
2-Mercapto-ethanol, 50umol/L, 2x3.9ul
Pyruvic acid, sodium salt, 1mmol/L, 2x110mg
Hepes Free acid, - 2x1.5g
Sodium bicarbonate, - 2x1.5g
Gentamyoin sulfate injection,50 U/ml, 2x50000 U
DDW ==>2x1000ml
pH ==>7.2
立即，0.22um 滤菌==>==>4度密封保存
用前加10%NBS。
一到两个月，需要往保存的1640中加原量的L-Glutamine（分解了）。
我们的前辈，是个超级细胞高手，强烈推荐所有试剂都用进口的（特别是前四个）。
我们用的很好，不知在你们那怎样，试试吧。

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发表于 2015-8-10 16:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

前面列的那些照片都是什么细胞？想看看你的RAJI长啥样？
谢谢！

windboy[使用道具]
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发表于 2015-8-10 16:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主,我想请教您一个问题.我最近养了293细胞.但生长状态不太好,我不知道如何来进行调整.
如果是贴壁比较牢靠的细胞,生长状态不好的话,我们可以采用胰酶消化筛选的方法来调整细胞的状态.就是用较低浓度的胰酶轻轻消化一下,将液体吸出后,然后加入培养基和血清,不传代.这样,贴壁不紧的细胞就会被淘汰,经过几轮这样的处理后,就能得到状态好的细胞.但是,293细胞属于贴壁不牢的细胞,因此,用这样的方法处理的话就不妥了.不知道应该用什么方法来调整状态?请给予指导.谢谢了!

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发表于 2015-8-10 16:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

前面列的那些照片都是什么细胞？想看看你的RAJI长啥样？
谢谢！

=========================================

我在第一页贴的图，全是Raji细胞。
不好意思，最近实在太忙，今天才看到你的帖子。

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发表于 2015-8-10 16:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 windboy 于 2015-8-10 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼主,我想请教您一个问题.我最近养了293细胞.但生长状态不太好,我不知道如何来进行调整.
如果是贴壁比较牢靠的细胞,生长状态不好的话,我们可以采用胰酶消化筛选的方法来调整细胞的状态.就是用较低浓度的胰酶轻轻消化 ...

你在养293？太好了，我可能下周也要开始养，还要希望多多交流！
你知道293， HEK293, HEK293 T, 还有293 T到底有啥区别？哪种可以做包装细胞？我有点胡涂。。。

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发表于 2015-8-10 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主的耐心真是厉害，看来是妹妹无疑了。
如果淋巴细胞分不出来，到底是怎么回事呢？明明出现了pbmc层，可吸取后再一离心，就什么都没有了，只有点点的细胞，真是郁闷啊。

===============================================================================================================

你是不是离心后倒上清时倒的太厉害把细胞都给倒掉了？倒上清速度不能快，而且一次成功，不能反复。你可以把你倒出的液体收集起来看看里面是不是有细胞。

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发表于 2015-8-10 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我在第一页贴的图，全是Raji细胞。
不好意思，最近实在太忙，今天才看到你的帖子。

=====================================================================

一个星期前，我的RAJI也有这么漂亮，可是昨天一场污染，全毁了，真是让人伤心欲绝。

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发表于 2015-8-10 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
痛经

不要难过，污染在所难免，我也有惨痛经历!!!
尽快重新复苏吧。
想尽办法拯救，往往费时费力，还不得要领。

sistis[使用道具]
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发表于 2015-8-10 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位前辈好！本人现养着U937细胞，用1640+15%血清，可细胞总是在复苏的第3天以后开始出现大片的死亡（复苏后第一次换液时看着还挺好），也没见明显污染，特纳闷。特请高人指点迷津，谢谢！

==================================================

你复苏后的情况,再详细说说.
U937细胞是很好养的.我用的是RPMI+10%FBS.隔天继代一次.

sistis[使用道具]
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发表于 2015-8-10 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 NBA 于 2015-8-10 16:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相关疾病：
痛经

不要难过，污染在所难免，我也有惨痛经历!!!
尽快重新复苏吧。
想尽办法拯救，往往费时费力，还不得要领。

我的悲惨在于当时用的是试验室的最后一瓶RAJI，自己养起一大堆后，用同样的方法冻存，现在一株也复苏不起来了，因为当时想着一股气把试验做完，却没考虑到冻存上的问题，哪料来这场不测风云，怎么向老板交代啊？

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