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标题:【讨论帖】看图说细胞－状态好坏鉴别

sistis[使用道具]
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发表于 2015-8-10 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 sistis 于 2015-8-10 16:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
各位前辈好！本人现养着U937细胞，用1640+15%血清，可细胞总是在复苏的第3天以后开始出现大片的死亡（复苏后第一次换液时看着还挺好），也没见明显污染，特纳闷。特请高人指点迷津，谢谢！

========================================= ...

难道是我们试验室冻存的U937有问题？我取出来的都是2003年冻的，不知道还行吗？
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发表于 2015-8-10 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
难道是我们试验室冻存的U937有问题？我取出来的都是2003年冻的，不知道还行吗？

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很有可能细胞在冻存时状态已经不是很好.我之前用别人冻存的细胞也出现过这样的问题.
另外,2003年的细胞是冻存在液氮还是-80度.如果是液氮中是没问题的,如果是-80度就会受影响.-80度超过三个月就不太容易复苏,起码要花上两三周细心照料,不时的换液才能长好.
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发表于 2015-8-10 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
倒是冻在液氮中的，不过今天听一个师姐说他们当时冻的时候细胞好象不太好！这下完了。
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gmt[使用道具]
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发表于 2015-8-10 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的经验培养液中L-Glutamine两周就有问题，比较难养的细胞最好用时再加L-Glutamine。
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发表于 2015-8-10 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问视野中央附近那个细胞上的“泡泡”是什么呀？我的细胞老有那个，不碍事吧？

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在高倍镜下，你会清楚的看到RAJI细胞表面有些突起，且这些突起常常是会“动”的。（你说的“泡泡‘就是这些’突起”，应该没问题的）
哪天我把手上“舞动的RAJI”的图片整理一下，开个新贴，再详细介绍。
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发表于 2015-8-10 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

前段时间养的raji 细胞长得挺好，自己冻存了两批，可现在总是复苏不活，不知是什么原因？冻存和复苏有什么特殊要求吗？请楼主及各位高手指点！谢谢！
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eric930[使用道具]
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发表于 2015-8-10 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看了你的图片，才知道那些大个子原来是好的细胞，我以前以为是细胞肿胀，快死了
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发表于 2015-8-10 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前段时间养的raji 细胞长得挺好，自己冻存了两批，可现在总是复苏不活，不知是什么原因？冻存和复苏有什么特殊要求吗？请楼主及各位高手指点！谢谢！

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我新开了一贴，专门介绍细胞冻存、复苏时的注意事项，及其解决发法。
链接：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1322275&sty=1')
希望有帮助，祝好运！
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sistis[使用道具]
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发表于 2015-8-10 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是啊，在这学到不少，也得到很多鼓励和帮助，也许就是这么多的关心，我的RAJI现在又起死回生了，这次我也不敢大意了，小小心心的冻了几管，复苏还不错。
我这次用的冻存液是血液科用来冻存干细胞的，只不过过了期，不能用在人身上，它的配方是DMSO10ML，羟乙基淀粉（HES）12G，和生理盐水配成68ML溶液，室温保存，用时加入25%的人血清白蛋白（我没有白蛋白，直接就用的小牛血清），如上配好后，与等量的1640吹悬的细胞混合即可。
这种冻存液按说明是可以不需程序降温，直接就可以扔进-80度，不过我还是谨慎点，从-20——气相液氮——液相液氮。
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发表于 2015-8-10 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种方法好象比我们的麻烦，希望效果更好。
我们使用普通的配方：1640Big SmileMSO:NBS=4:5:1,
厚壁泡沫塑料盒，-80度24h，入液氮。
效果一向不错，但是需要注意一些细节的处理！
（有兴趣的话看看cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1322275&sty=1')，希望有帮助）
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