小中大提到的加一抗时要离心，是多少温度，多大转速离心十几秒？
还有抗体稀释液从哪里可以买得到？主要成分是什么？有没有含破膜剂？可不可以用含破膜剂的PBS代替？
还有，串色了，应该从哪些方面克服？
谢谢！
charles97 ：
关上门，拉上窗帘（最好是透一点光，不然不好操作的），我们是这样避光的。
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1.离心是为了怕抗体有沉渣(当然这个不一定,进口的质量好的就不存在,但也要预防分装公司在分装过程中出现什么问题)而影响结果; 2.因为抗体会挥发到盖子上,而这些抗体都比较珍贵,所以建议离心. 因为离心只是以上两点主要作用,所以不要求温度和转速,只要把离心机打开5秒左右后就关上
我都是用PBS稀释的,当然,很多代理公司都可买到稀释液,不过我还没买过,嘿嘿,替老板节省嘛,就连便宜的要死的PBS都全是自各配的. 我上面说过,如果你的一抗是在胞浆表达,就不用破膜剂,除非在胞核表达,你可以用0.01-0.1%的TRITON-X-100进行渗透.
我不明白着窜色是什么意思,是不是,该在胞浆显色的二抗结果在胞核表达很强的荧光?这个是我刚开始做的时候也是这样,就是用了所谓的破膜剂TRITON,有一次因为边做边吃饭而用的时间也长了,结果几乎都在胞核里出现,胞浆反而弱,所以我后来干脆就不用TRITON 渗透了,效果好了! 还有你所谓的窜色是不是该在胞核表达的荧光在胞浆也可看到淡淡的一层呢?这个正常,照片照出来后你只要调一下背景,把背景调黑,这不仅看不到你所说的窜色,而且照片也漂亮 ,很简单的,这个只需要你对荧光显微镜多了解一点就行了.
不知道我说清楚了没,祝好运!!!
