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标题:【求助】 细胞免疫荧光

zhy平平[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也准备用CY3，不知到你的稀释度是多少？我准备用1：50，不知道行吗？二抗也有荧光你要注意有没有过程干片子的可能，或者你PBS洗时没换枪头

================================================================================================

不知道你的红色荧光解决的怎么样了？我前一阵子也在做组织的免疫荧光，但是背景色非常严重，当时用了1:200的二抗。
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近也做免疫荧光，用的是红色的染料CY3，发现一个问题，这个荧光2抗非特异性太强了，染出来的照片是很漂亮，但是一看只加CY3的二抗对照，也是有很强的染色，几乎没什么差别，这个问题怎么解决啊？通过降低稀释度或多次清洗能减弱或避免非特异性着色吗？

===========================================================================

我也出现了这样的情况 就是加了一抗和不加一抗的组织标本片子都出现了局部增强的染色。
请问你的问题解决了吗？可否有什么经验分享？
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢以上战友的经验，在这问楼主一下，我们用的BSA是不是最好现配现用好，我第一次做的结果还行，这次做的是用的十天前配的BSA，最后结果不太好，会不会是和这个有关呢？感觉做的步骤应该没啥错误，谢谢指点！
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vcve[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢以上战友的经验，在这问楼主一下，我们用的BSA是不是最好现配现用好，我第一次做的结果还行，这次做的是用的十天前配的BSA，最后结果不太好，会不会是和这个有关呢？感觉做的步骤应该没啥错误，谢谢指点！
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gogo[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不错不错，请问一抗、二抗和各种细胞器染料的稀释比例一般是多少啊？我知道不同抗体的稀释比例不一样，但是大体范围是多少啊？
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qhyu[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问把6孔板做成湿盒是何意啊，偶才开始做这个，所以不太理解啊，谢了
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ha111[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位战友，如果一抗做免疫印迹效果不好的话，还有必要试试免疫荧光吗？还是再买一个抗体呢？（说明书上写着能做免疫荧光）
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xevin[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想请教下各位，我在荧光显微镜下观察细胞免疫染色时遇到了串色的问题，应该怎么解决？
细节是这样的我蓝色激发光观察我转染的GFP蛋白，此时理论上只显示绿色荧光，但是这时部分细胞区域和非细胞区域出现了偏黄色和黄色荧光（因为我的目的蛋白标记的是FITC红色荧光），这时的现象解释应该是红+绿=黄；
所以我想问下大家这是什么情况？为何激发产生绿光时，还出现了红色荧光的重叠，是为什么？如何解决？是不是我二抗稀释度太低，而造成背景混杂，而出现的影响？还是什么原因，非常感谢！
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发表于 2015-8-12 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 xevin 于 2015-8-12 10:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

想请教下各位，我在荧光显微镜下观察细胞免疫染色时遇到了串色的问题，应该怎么解决？
细节是这样的我蓝色激发光观察我转染的GFP蛋白，此时理论上只显示绿色荧光，但是这时部分细胞区域和非细胞区域出现了偏黄色和黄色荧光（因 ...

荧光显微镜参数设置不恰当导致激发光不正确所致，我DAPI染色时也遇到过类似问题，把显微镜设置弄明白就好了。
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xyw5[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

难得的好贴，学习了。我想请教一个问题，就是我在拍照的时候发现我的DAPI（紫外光激发）不仅被紫外光激发，而且当我用蓝光和绿光激发的时候，也能在视野里看到相应的荧光，蓝光下显绿色，绿光下是红色，不过绿光下的荧光比较弱，我想问一下是不是DAPI的问题，比如降解了，还是显微镜参数设置的问题？
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