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标题:【求助】关于结晶紫染液的配制--By G

dreaming[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于结晶紫染液的配制--By G

看到文献中提到结晶紫是0.05%的结晶紫溶在10％的甲醇中，在论坛上又查到的是溶在无水乙醇中。不知有谁知道这其中有什么讲究吗？
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小鱼鱼[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

结晶紫的染色用途：
1）组织中作细菌染色；
2）与茜素红作线粒体颗粒染色；
3）用于纤维素及神经胶质、类淀粉染色
4）属于核染色剂（碱性），活体染色剂。
配制结晶紫浓度文献上提的0.1%好像多一点的（我查到的），有在ddH2O或PBS里配的，也有在甲醇或乙醇里配的，在后二者中，结晶紫易于溶解，甲醇和乙醇都可以固定细胞用，二者无多大的区别（如果在ddH2O或PBS中，应该先用4%PFA固定细胞）。
我老板以前美国实验室寄过来一份方案，结晶紫是用纯的甲醇（或乙醇）配成0.5%浓度（母液），用之前以1（母液）：4.5（生理盐水）再配成染液（配好后避光可以存放24小时）。如果不稀释的话，你可要当心你的96孔板上漫出来！
楼上的链接贴是我发的求助贴，我不知道有没有说话的力量，你就仅供参考吧！因为现在我的细胞染色结果老板认为不理想，我正考虑是不是用MTT来做！
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dreaming[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看了你们的帖子了，我也感觉染色的深浅并不重要。可以用10％的醋酸提取细胞里的染料，在560nm测OD值，以此来反映黏附的细胞数量。谢谢你提供的配制方案！By the way,这母液能保存多少时间，也要避光吗？
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2015-8-12 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

No, you can keep it on your bench for a very long time. I've checked my stock solution, it was made by May 4th, 2001. And it still works very well today.
Just like hinavy mentioned before, you can make it by H2O or anything else.Good luck!
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dreaming[使用道具]
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发表于 2015-8-12 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
on your bench ?do u mean it needn't avoid light?thank u!
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发表于 2015-8-12 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

No. I mean for stock solution. Can you tell me what kind of purpose you use for ?
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发表于 2015-8-12 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那是不是储存液还得避光？无需冷藏吧？我要做transwell，用于染侵袭过matrigel的细胞。想先用甲醇固定，再用结晶紫染色。如果我用甲醇配结晶紫，那是不是可以固定染色一步完成？时间怎样控制？
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dog002[使用道具]
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发表于 2015-8-12 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

染液配好后避光放置5个月以后使用才是最好的，越久的愈好然出来的片子颜色才最好。来不及就买吧。
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-8-12 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PBS 中固定和染色都很简单，固定20分钟，染色5-10分钟就可以。我没有做过MATRIGEL，不知道在MATRIGEL里染色后你怎么把BACKGROUND去掉？OTHERWISE 黑乎乎你怎么COUNT细胞啊？
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dreaming[使用道具]
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发表于 2015-8-12 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

transwell不是有层膜吗？我要测的是侵袭到膜下面的细胞。我先固定染色，再把膜上面的matrigel连同没侵袭过去的cell用棉签擦干净，这样背景就清楚了。不知liubaoyin 说的“来不及就买”是什么意思？买现成的配好的？我已经买了固体的，还想明天配，后天用呢。希望效果不会太差！God bless me!
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