小中大谢谢你的解答。
我现在还有一个问题是，药物最高浓度的OD值要比调零孔低，所以如果减去调零孔的话，就成负值了，这样的话肯定不行吧，而且我做过很多次，都是出现这种现象。不知你的调零孔的吸收值一般在多少？我的对照孔的细胞在培养48h后测的值为0.5左右（490nm）。我曾经做过比较，加血清的孔和不加血清的孔测出的值虽然有区别，但不大，而且吸收值都比较高。
昨天我的一个师姐说别人做mtt时，有六个复孔，如果其中有三个复孔比较接近（它们之间的差值一般在0.001－0.007之间），就取这三个值，其它的就不用了。不知这样可否。差值多少为好，我感觉她说的这个差值对我来说，很难让六个复孔或是5个复孔有这么小的差值。而且周围的孔，加了PBS的，测出的值一般情况下在0.04左右。
另外一个问题是，接种细胞，我感觉比较难，真的很难保证每个孔之间种的细胞很一致。我们的做法是消化细胞，数细胞，然后在50ml的离心管中配成5×104cells/ml，每孔加100ul，我是S型种板子，加10个孔吹打细胞悬液。我现在想问一下加多少个孔吹打，吹打多少次可以将细胞吹匀，而且用枪吸的时候，枪头在离心管内吸的位置（他们说每次吸的时候枪头最好在离心管的最底部，这样每次吸的细胞差异就小了）。
谈一下你的经验吧。谢谢。
