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标题:【转帖】MTT实验两年心得

milkdog[使用道具]
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发表于 2015-8-12 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哈哈！楼主好热心！谢谢！我们已经在hanks液里加了千分之五的甲醇还是溶解度差！以前也用过DMSO情况一样！
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standup[使用道具]
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发表于 2015-8-12 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我说的是直接用DMSO去溶，比如你最终加药浓度为20uM，那么一般你要用DMSO溶解成20mM或更高的母液，再用Hanks或者培养基稀释，保证DMSO在工作液中浓度低于影响细胞生长的浓度，并不是在Hanks里加DMSO或者甲醇。
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发表于 2015-8-12 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我说的是直接用DMSO去溶，比如你最终加药浓度为20uM，那么一般你要用DMSO溶解成20mM或更高的母液，再用Hanks或者培养基稀释，保证DMSO在工作液中浓度低于影响细胞生长的浓度，并不是在Hanks里加DMSO或者甲醇。
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发表于 2015-8-12 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也有同样的疑问？我们是敷药三个小时，再不吸除药加MTT20微升四个小时！那药物作用时间应该算是七个小时还是四个小时？怎么解释呢？我们是想得到三个小时的作用时间
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发表于 2015-8-12 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请教一下，在加MTT之前不吸弃原来的培养基（含有药物等处理因素），那么如果试验设定药物的处理时间比如是4小时，加了MTT再培养4小时，实际上药物就处理了8小时。这样得的数据是否准确呢？是不是在加MTT之前还是吸弃原来的培养基比较好？
怎么没有人回答呢？知道的人请赐教嘛，大家也可以讨论一下吧。
还有一个问题，我现在做农药的MTT，但是发现有的农药染毒的孔OD值比空白孔还大，这样算出的存活率都大于100％了，而且有一次高剂量的OD值比低剂量还大。我想是不是因为该农药的产物具有氧化还原性（另一个农药的结果还比较好），能与MTT生成结晶，干扰了结果，我用PBS洗了两次结果还是一样的。如果再不行我就想干脆用苔盼兰染色算了，虽然没有MTT那么准确，但是如果不能用MTT作的话也没有别的办法了。
请高手指点！！
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2015-8-12 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问我做MTT时加的药是一种单克隆抗体，配制这种抗体最终加到孔板里时，是用无血清培养基稀释呢还是用有血清的完全培养基稀释呢？听说血清影响检测结果了，那我如果用有血清的完全培养基稀释后在加MTT前把培养基都吸出来然后再加用PBS稀释的MTT是否就能消除血清的影响呢？谢谢
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发表于 2015-8-12 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我在做MTT实验时，有几次发现低浓度药物孔的OD值比高浓度药物孔的OD值低，对照也是如此，起初怀疑是我弃上清时洗去了细胞，又重复了几次，十分小心的弃上清，还是存在这种现象，不知是什么原因？敬盼答复
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发表于 2015-8-12 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵上个问题还没解决，又出现新问题了，我是测7天的MTT，可是96孔板里细胞是一起稀释好加进去的，那岂不是时间越久细胞长的越满了吗（肯定超过80%-90%融合了呀）？那不是就看不出加药的效果了吗？如何克服这个问题呢？急盼高手指导
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发表于 2015-8-12 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
2.5天时加MTT检测，出来的OD值都在1以上，个别能达到2，波长570nm，MTT20ul，请教各位帮忙分析下，多谢了
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莲花白[使用道具]
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发表于 2015-8-12 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的MTT检测出OD值均在1以上，个别达到2，波长570nm，每孔20ulMTT
请各位帮忙分析下，多谢了
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