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标题:【转帖】MTT实验两年心得

#甜#[使用道具]
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OD值大于2可能有两个原因:
1、接种的细胞太多。如果你计数准确的话,也可以尝试少接种一些,不是一定都要1×104的。
2、污染。细胞污染以后数值会偏大,有时可以镜下看到污染。
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ha111[使用道具]
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呵呵上个问题还没解决,又出现新问题了,我是测7天的MTT,可是96孔板里细胞是一起稀释好加进去的,那岂不是时间越久细胞长的越满了吗(肯定超过80%-90%融合了呀)?那不是就看不出加药的效果了吗?如何克服这个问题呢?急盼高手指导
换液时可用2%血清培养液
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niangao1980[使用道具]
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大家都是用DMSO吗?怎么看到有的文献是用HCl-isopropanol溶液,然后570nm测定?
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莲花白[使用道具]
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应该没污染,镜下观察正常。1可能细胞数太大2可能检测时操作时间过长。
我用DMSO,570nm测定
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nn255[使用道具]
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MTT还能用于组织标本中的细胞增殖检测啊?该怎么弄呢?
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tudou85[使用道具]
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DMSO的使用比盐酸-异丙醇方便,至少盐酸-异丙醇溶液你还得配置,而DMSO拿来就可以用,而且使用浓盐酸时你得小心一点,要注意安全。而DMSO就没有这么麻烦。当然DMSO和盐酸-异丙醇都可以用来裂解细胞溶解被还原的MTT,如果手头上没有DMSO,用盐酸-异丙醇溶液也是可以的。至于盐酸-异丙醇如何配置可以查查书,不好意思,因为很少用,忘啦!
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tudou85[使用道具]
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应当可以,只要组织是活的,因为MTT检测与琥珀酸脱氢酶活性有关,只要组织中有此酶,MTT反应同样会发生。当然组织需要匀浆。
申明以下,以上是理论推测,我还没试过,如有人试过,不妨也来交流交流。
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dog002[使用道具]
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盐酸-异丙醇不如DMSO溶解的快。
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langlang[使用道具]
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Before add MTT to 96-well plate, you do need to remove supernate then add MTT.
If you want directly to add MTT with supernate, that is not so called MTT, it's another
kind of regaent so called MTX.
I strongly believe that OD should be used in NM570, other ODs are not correct.
If useing od 570nm and the reading should in 1.0 to 2.0, but some times depend on
that ELISA Reader's liner range. This has to be checked. The reading range out of
2, some times means we put too much cell in the well, so try to reduce the
concentration of your seeding cell.
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toy[使用道具]
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通常空白的确有值,多是由于板内的培养液残余,另外你的空白是不是都在板上的同一个位置,可以考虑下板本身的状况
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