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试剂和设备
l 细胞悬浮液;
l 6孔平底组织培养板,或φ60 mm培养皿;
l 18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的盖玻片;
l 含血清培养基(通常为 RMPI 1640,含10% 小牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素);
l 超净工作台;
l CO2孵箱;
l 盖片镊;
操作步骤:
1. 用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2. 将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3. 在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4. 将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5. 将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明
1. 本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2. 所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3. 盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4. 如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5. 如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
<摘自"基因克隆网站">