【求助】组织蛋白变性后的半凝固沉淀

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标题:【求助】组织蛋白变性后的半凝固沉淀

yayayu[使用道具]
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发表于 2015-8-15 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

提取肝癌组织蛋白以后，不知道为什么都会在煮了5分钟以后管底出现白色的半凝固的沉淀，然后把PCR管倒过来这些凝固也不会流下来，用手弹一下倒是会下来
我用的是200ul的pcrG管装（是不是太小了），，蛋白已离心留上清，装80ul蛋白提取液和20ul的5*SDS上样缓冲液（碧云天），用水煮到沸腾，5min。
还是因为蛋白浓度太高？？用BCA测定浓度在10ug/ul左右

大大[使用道具]
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发表于 2015-8-15 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

蛋白变形沉淀是很正常的事情啊。说明蛋白浓度很好。直接上样就行了

双子座[使用道具]
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发表于 2015-8-15 10:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

“蛋白变形沉淀是很正常的事情啊” 做western blot变形后沉淀依然可以用来上样吗？这样会不会影响跑胶。因为我从来没有碰到过这种情况，学习下~
10ug/ul的蛋白质浓度对做western blot来说不算太高，还不至于加热下就形成沉淀，至少我在实验中这种浓度的蛋白质还没有出现过加热生成沉淀的情况；请问你在western blot实验中发现过这种浓度的蛋白质受热沉淀吗？

mimima[使用道具]
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发表于 2015-8-15 10:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

“还是因为蛋白浓度太高？？用BCA测定浓度在10ug/ul左右” 正常情况下，这个浓度加热是不会引起沉淀的。
如果可以建议你换个上样缓冲液试试~

蓝色雨梦[使用道具]
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发表于 2015-8-15 10:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

我经常看到这个现象。不影响你western的结果。